前列地尔后处理对兔再灌注心肌离子通道影响.docVIP

前列地尔后处理对兔再灌注心肌离子通道影响 　【摘要】 目的 研究前列地尔后处理对兔缺血/再灌注心肌细胞膜离子通道活性的影响及对缺血/再灌注心肌的保护机制。方法 采用兔心肌缺血/再灌注模型，将32只雄性日本大耳白兔随机等分为4组:假手术组(S)、缺血再灌注组(I/R)、缺血后处理组(Ipost)、前列地尔后处理组(PGE)。测定心肌可溶性细胞间黏附分子1(sICAM1)和髓过氧化物酶(MPO)含量及Na+K+ATP酶和Ca2+ATP酶活性。结果 与I/R组比较,Ipost和PGE组心肌中sICAM1、MPO含量显著降低和离子通道活性明显升高(Plt;0.01)。结论 前列地尔后处理减少中性粒细胞的浸润，提高离子通道活性，可能是其发挥心肌保护作用的机制之一。 【关键词】 Na+K+ATP酶;Ca2+ATP酶;心肌缺血/再灌注;前列地尔;后处理 血运重建术后的再灌注损伤已成为影响急性心肌梗死患者预后的一个重要因素，缺血/再灌注(I/R)损伤机制之一是过度的炎症反应。中性粒细胞可以通过多种途径介导I/R损伤〔1〕，抑制细胞膜离子通道活性是其损伤心肌的途径之一。后处理无须预先判断疾病的发生，在临床上易于实施。前列地尔脂微球是依据靶向药物转运理念制成的前列腺素E1(PGE1),基础实验证实〔2,3〕，于缺血前或再灌注结束后给予前列地尔，可明显减轻缺血心肌的再灌注损伤。然而于心肌再灌注开始时给予前列地尔的研究少见报道，特别是前列地尔在心肌I/R过程中对细胞膜离子通道的影响鲜见报道。本研究目的在于观察前列地尔后处理能否减少中性粒细胞的浸润，保护细胞膜离子通道活性，从而减轻缺血心肌再灌注损伤，为急性冠脉事件中应用前列地尔提出新的理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 药品与试剂 前列地尔注射液(凯时)为北京泰德制药有限公司生产，肌酸肌酶(CKMB)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM1)、髓过氧化物酶(MPO)、Na+K+ATP酶和Ca2+ATP酶测定试剂盒均为南京建成生物工程研究所提供。 　　1.2 动物 雄性日本大耳白兔32只，体重2～2.5 kg，由辽宁医学院动物中心提供。 　　1.3 方法 　　1.3.1 动物模型制备 用10%水合氯醛(3 ml/kg)将兔麻醉后，固定，接动物呼吸机，接Ⅰ、Ⅱ导联心电图，切开皮肤，沿胸骨左缘剪开第3～5肋软骨，撑开胸腔切口，用止血钳将左心耳提起，于左心耳下0.3 cm处的冠状动脉左心室支穿3.0丝线，结扎60 min，剪开结扎线，再灌注120 min。结扎后Ⅰ﹑Ⅱ导联ST段弓背向上抬高，T波高耸，心肌颜色变苍白标志心肌缺血造模成功。放松结扎线后，抬高的ST段下降大于50%以及局部心肌变红为心肌再灌注造模成功。 　　1.3.2 分组及处理 将32只兔随机等分成4组。①假手术组(S)：剪开心包，穿线而不结扎冠状动脉，于颈静脉缓慢推生理盐水20 ml。②I/R组:结扎60 min后松开，于颈静脉缓慢推生理盐水20 ml，再灌注120 min。③缺血后处理组(Ipost)：结扎60 min后，开放30 s ，再阻断30 s，重复3次，余同I/R组。④前列地尔后处理组(PGE):缺血60 min，于再灌注前颈静脉插管缓慢静推前列地尔注射液10 mg/kg+生理盐水共20 ml,余同I/R组。 　　1.3.3 观察指标与检测方法 再灌注120 min结束后立即于左颈动脉插管取血2 ml，采用比色法检测血清CKMB含量。再灌注结束后迅速摘取动物心脏，于结扎线下0.2 cm处，取左室壁非梗死区心肌约2 g，制备心肌组织匀浆，采用比色法检测MPO含量，采用酶联免疫吸附法测定sICAM1含量，按照试剂盒说明书操作测定Na+K+ATP酶和Ca2+ATP酶活性。另取左室壁非梗死区心肌，石蜡包埋切片HE染色处理。 　　1.4 统计学处理 采用SPSS13.0分析软件进行统计分析，计量资料用x±s表示，多组间显著性检验采用单因素方差分析，两组间差异采用q检验。 　　2 结 果 　　2.1 各组兔血清CKMB及心肌sICAM1和MPO的含量 与S组比较，I/R组、Ipost组、PGE组血清CKMB及心肌sICAM1和MPO含量均明显增高(均Plt;0.01);与I/R组比较，Ipost组、PGE组血清CKMB及心肌sICAM1和MPO含量均显著降低(均Plt;0.01);Ipost组与PGE组血清CKMB及心肌sICAM1和MPO含量无显著性差异(Pgt;0.05)。见表1。表1 各组血清CKMB及心肌sICAM1和MPO的含量(x±s，n=8)与S组比较：1)Plt;0.01，与I/R组比较：2)Plt;0.01;下表同 　　2.2 各组兔心肌Na+K