外周血单个核细胞HBV复制状态及干扰素-γ表达及分泌关系.docVIP

外周血单个核细胞HBV复制状态及干扰素-γ表达及分泌关系 　 作者：陈天艳，陈瑞琳，蔺淑梅，叶峰，张曦，陈云茹，赵英仁，张树林 【摘要】 　　目的: 研究HBV侵犯外周血单个核细胞（PBMC）及对IFN-γ表达和分泌的影响. 方法: 慢性HBV感染者60例，巢式PCR检测PBMC中HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）；ELISA法检测血清IFN-γ水平；实时定量RT-PCR方法检测PBMC中IFN-γmRNA的表达水平. 结果: 48.3%（29/60）的患者PBMC中检测到cccDNA；血清IFN-γ水平低于对照组（P＜0.05）；PBMC中IFN-γmRNA表达水平低于对照组（P＜0.01）；PBMC中cccDNA阳性组IFN-γ表达和分泌水平低于cccDNA阴性组（P＜0.01）. 结论：HBV慢性感染者PBMC中IFN-γ表达和分泌水平降低. 【关键词】 肝炎病毒 乙型 DNA 环状 外周血单个核细胞 干扰素Ⅱ型 　　【Abstract】AIM: To study how HBV affect the expression and secretion of IFN-γ in PBMC. METHODS: sitty patients with chronic hepatitis B were studied. HBV cccDNA in PBMC were amplified by nest-PCR. The level of IFN-γ in the serum was determined by ELISA. The expression of IFN-γ mRNA in PBMC was determined by real-time RT-PCR. RESULTS: HBV cccDNA in PBMC were determined by 48.3%（29/60）in patients. The serum level of IFN-γ in the patients was lower than that in control group(P＜0.05). The expression of IFN-γ in PBMC wsa lower in the patients than in control group(P＜0.01). The expression and secretion of IFN-γ were lower in cccDNA positive group than in cccDNA negative group（P＜0.01）. CONCLUSION: The expression and secretion of IFN-γ in patients with chronic hepatitis B are decreased. 　　【Keywords】 hepatitis B virus; DNA,circular; peripheral blood monocytes; interferon typeⅡ 　　0 引言 　　HBV感染慢性化是机体免疫功能紊乱，主要是细胞免疫功能低下所致，Th1/Th2细胞亚群的失衡与HBV持续感染密切相关. IFN-γ主要由活化的Th1细胞和NK细胞产生，可通过多种途径直接或间接促进Th1应答，提高细胞毒性T细胞（CTL），自然杀伤细胞（NK），单核-巨噬细胞活性，在清除HBV感染的细胞免疫反应中发挥着重要作用. IFN-γ活性水平直接反映了Th1细胞的功能，与HBV感染后的最终结局密切相关. 因此，在证实HBV侵犯PBMC基础上，我们进一步比较慢性HBV感染者PBMC中cccDNA阳性和阴性组IFN-γ表达和分泌水平，以了解HBV侵犯PBMC并在其中复制对免疫细胞功能的影响. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 2007-01/2007-05慢性HBV感染者60(男43，女17)例，年龄15～52（平均34.7）岁. 诊断标准符合2000年制定的《病毒性肝炎防治方案》标准. 所有患者均排除HAV，HCV，HDV，HEV，柯萨奇病毒等感染和药物、酒精等其他原因造成的肝脏损害. 健康对照者30例，均来自西安市健康献血员. 无菌采集未抗凝静脉血2 mL,-4℃离心后立即分离血清，-20℃冻存；肝素抗凝静脉血10 mL，常规密度梯度法分离淋巴细胞，洗涤细胞5次，分别收集第5次洗液和细胞. 将细胞分2份，一份-70℃保存，用于检测乙肝病毒核酸；另一份按1×1010/L细胞密度加入1 mL Trizol Reagent，-70℃冻存，用于提取总RNA. Trizol Reagent (美国invitrogen公司),绿豆芽核酸酶（MBN）（美国