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大鼠内因湿热造模方法探究 　【摘要】 　　目的探讨不同时间内因造模方法对模型大鼠胃动素(MTL) 、胃泌素(GAS)的影响。方法分为正常组、模型I组(高脂饮食+白酒灌服10 d) 、模型Ⅱ组(高脂饮食+白酒灌服20 d)，模型Ⅲ组(高脂饮食+白酒灌服30 d) ;运用放免法观察MTL、GAS的变化。结果模型Ⅱ组、Ⅲ组MTL、GAS水平均显著升高, 模型I组与对照组比较无显著性差异。结论胃动素、胃泌素指标异常所产生的病理生理效应,会出现腹胀、纳呆、大便溏、呕恶等。高脂高糖饮食和白酒灌服20 d是脾胃湿热证病理模型内因造模中较合适的时间。 【关键词】 湿热证; 模型; 胃动素; 胃泌素 脾胃湿热证是湿热证中的常见证候之一, 也是脾胃病中最常见的临床证型。脾胃病的诸多症状, 都可由脾胃湿热产生。而用科学合理的方法建立脾胃湿热证动物模型是研究脾胃湿证本质的重要手段之一。目前关于湿热证动物模型的报道较多，但多限于湿阻证和温病湿热方面的研究，中医学理论认为脾胃湿热形成与饮食内伤关系密切，本实验拟观察内因造模方法即高脂高糖饮食和白酒建立脾胃湿热证动物模型的合理时间。 　　1 材料 　　1.1 动物SD大鼠40只，雌雄各半，体质量(200±20)g，清洁级。由广东医学院实验动物中心提供，SCXK（粤）2008-0008：2008A036。适应性喂养标准饲料7 d后，随机分为4组，每组10只。 　　1.2 药物及试剂红星二锅头酒(酒精度为56度)，北京红星股份有限公司产品；胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)放免药盒由解放军总医院科技开发中心放免所提供。 　　2 方法 　　2.1 造模方法正常组：普通喂养；模型组：将大鼠饲以高脂高糖饮食［1］，即在普通饲料喂养的基础上，加用200 g／L蜂蜜水自由饮用，且隔日按大鼠体质量灌服油脂15 g／kg，并与油脂隔d灌服20 ml／kg白酒，模型I组灌服10 d，模型Ⅱ组灌服20 d，模型Ⅲ组灌服30 d。 　　2.2 标本采集制备与指标检测 　　2.2.1 标本采集实验结束后，模型I组10 d后，模型Ⅱ组20 d后，模型Ⅲ组30 d后。禁食24 h，次日用3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，剖开胸腔及腹腔，心脏取血，剪取结肠组织约0.5 × 0.5cm，用4%甲醛固定，常规石蜡包埋，切片，苏木精-伊红染色，光镜观察。 　　2.2.2 血清、血浆的制备心脏取血4 ml，其中2 ml放入空塑料管中，离心，取血清密封后，置于-20℃冰箱保存；2 ml放入含有注入含7.5﹪EDTA二钠30 μl和抑肽酶40 μl (乙二胺四乙酸二钠)的塑料管中混匀，4℃离心，取血浆置于-20℃冰箱保存待测。测定前置冷水中复融，混匀后，4℃离心，取上清测定。 　　2.2.3 胃泌素、胃动素放免测定血清胃泌素、血浆胃动素检测均采用放射免疫测定方法，检测仪器为上海原子核研究所日环仪器一厂出品的SN - 695B 型放射免疫r 计数测量系统。测定方法按药盒说明书进行。 　　2.3 统计学处理方法采用SPSS13.0统计软件进行数据处理, 各组别均数采用单因素方差分析,组间用q检验,Plt;0.05为有显著性差异, 各组大鼠血液中MTL 、GAS 的变化数据以±s表示。 　　2.4 观察指标一般情况:皮毛外观、精神状态、进食量、体质量、肛温、粪便性状。并检测大鼠血液中胃泌素及胃动素含量，以了解大鼠胃肠消化、吸收及运动功能。 　　　3 结果 　　3.1 一般情况3组大鼠灌酒后均出现醉卧扎堆，模型I组体质量增长较快，进食量减少，嗜睡懒动，皮毛无华，大便干结带少许黏液，肛温与正常组比较无明显变化；模型Ⅱ组、模型Ⅲ组前10d体重增加较快，后期变缓，饮少纳呆，精神萎靡，嗜睡懒动，毛发疏松粗糙，晦暗无光泽，粪便时干时溏， 肛温变动较大，3组间差别无统计学意义。 　　3.2 病理切片观察I组结肠各层完好，无炎症细胞浸润，黏膜上皮完整、连续；Ⅱ组结肠黏膜局部缺损，少量黏膜腺体被破坏，固有膜见炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，呈结肠黏膜慢性炎症表现；Ⅲ组可见黏膜层局部缺损，腺体萎缩，杯状细胞减少，排列稍紊乱，黏膜固有膜及黏膜下层均有炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主。 　　3.3 各组胃动素(MTL) 、胃泌素( GAS) 的变化比较见表1。表1 各组MTL 、GAS 的变化比较（略） 　　4 讨论 脾胃虚弱是湿热发病的前提条件，《素问·奇病论》说：“肥者令人内热”， 以饮食不节，饥饱失常，过食肥甘的方法损伤脾胃，阻碍运化，可以成功制造内湿，故在各种成功湿热证动物模型中多数以内因造模法为基础。本实验希望通过不同的作用时间，探讨在模型制作过程中，合理地控制内湿因素的作用时间。 湿热病邪为患时,以脾胃为病变中心,涉及多脏腑,中医脾胃主运化的功能包含现代医学之胃肠消化吸