复方通络胶囊对人脐静脉内皮细胞损伤保护作用.docVIP

复方通络胶囊对人脐静脉内皮细胞损伤保护作用 　【摘要】 目的　观察复方通络胶囊对缺氧-复氧所致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法 体外培养HUVECs，建立缺氧-复氧模型，倒置显微镜观察细胞形态，采用MTT法测定细胞存活力，检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平。结果 复方通络胶囊能明显减轻缺氧-复氧所致细胞形态学的改变、抑制内皮细胞损伤、明显减少LDH的释放(Plt;0.05，Plt;0.01)。结论 复方通络胶囊对HUVECs损伤有明显的保护作用。 【关键词】 复方通络胶囊;内皮细胞;缺氧-复氧;保护作用 　　To observe the protective effect of Fufangtongluo capsule on human umbilical vein endothelial cells(HUVECs)injury caused by hypoxia-reoxygenation.Methods HUVECs were cultured in vitro to build the hypoxic-reoxygenation model，then we observed cell morphology by inverted microscope，and determinated cell viability by MTT，and detected lactate dehydrogenase(LDH)level in cell culture medium.Results Fufangtongluo capsule can significantly inhibit cell morphology change and endothelial cell injury caused by hypoxia-reoxygenation and effectively reduce LDH release(Plt;0.05，Plt;0.01).Conclusion Fufangtongluo capsule has obviously protective effect on human umbilical vein endothelial cells injury. 　　[Key words] fufangtongluo capsule;endothelial cells;hypoxia-reoxygenation;protective effect 　　缺氧-复氧在卒中、心肌缺血等疾病病理生理过程中扮演着重要角色[1]。复方通络胶囊是以滋养肝肾、化痰消瘀为法所制定的中药复方，由首乌、黄精、海藻、僵蚕、天麻等组成。前期研究表明其对大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)大鼠有预防性脑保护作用。本研究通过体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，建立缺氧-复氧模型，观察细胞形态，采用MTT法测定细胞存活力，检测细胞培养液中LDH水平，探讨其对血管内皮细胞是否有保护作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 药品、试剂 复方通络胶囊，生药1.5 g/ml，南京市中医院提供;丹参注射液，正大青春宝药业有限公司，批号：0502181;RPMI 1640培养基，Gibco产品;完全DMEM培养基，Gibco产品;二甲基亚砜 　　(DMSO)，上海凌峰化学试剂有限公司;新生牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司，批号：051120;胰蛋白酶(1∶250)，Amresco分装;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号连二亚硫酸钠(Na2S2O4)，上海化学试剂采购站经销，批号90878;MTT[溴化-(4，5-二甲-2-噻唑基)-2，5-二苯基四氮唑]，Amresco分装。 　　1.2 仪器 CK40倒置显微镜，OLYMPUS，JAPAN;超净工作台，苏州净化设备厂;DG3022A型酶联免疫检测仪，华东电子管厂产品;752分光光度计，上海光谱仪器有限公司。 　　1.3 实验细胞 HUVECs细胞，购于中科院上海细胞库。 　　1.4 方法 　　1.4.1 HUVECs的培养及氧化损伤模型的建立 HUVECs按常规方法复苏后接种于40 ml培养瓶中，培养液为含10%新生牛血清的RPMI 1640培养液，37 ℃、95%O2、5%CO2条件下培养，待细胞长满瓶底后，倒掉培养液，用PBS轻轻荡洗两次，加入0.25%胰蛋白酶37 ℃消化2～3 min，用新生牛血清终止消化，吸管轻轻吹打数次，使细胞完全分散，倒置显微镜下观察，计数，将细胞浓度调整为1×108个/L的细胞悬液，接种于细胞培养板上(96孔、24孔)同样条件下继续培养，待细胞长满单层融合后，弃去上清，以含0.5%血清的培养液培养24