实验性脾气虚大鼠血清胃泌素、胃窦G细胞变化及黄芪建中汤干.docVIP

实验性脾气虚大鼠血清胃泌素、胃窦G细胞变化及黄芪建中汤干 　 作者：郑小伟 包素珍 王颖 宋红 【摘要】 目的］探讨脾气虚证大鼠血清胃泌素（gastrin，GAS）、胃窦黏膜胃泌素分泌细胞（G）的变化及黄芪建中汤的干预作用。［方法］以三因素复合的方法复制脾气虚证大鼠模型，随后分别以黄芪建中汤低、中、高剂量对脾气虚大鼠进行复健，在干预后不同时间段，分别检测血清木糖浓度、血清肌酸磷酸激酶活性、血清GAS水平及胃窦G细胞等指标。［结果］随用药时间的延长，各用药组上述指标逐步恢复；中、高剂量组用药21天时，与同期模型组比较，差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01）；其中，高剂量组对G细胞数的改善作用，优于中剂量组（P＜0.05）。［结论］脾气虚证胃窦G细胞数量减少，释放GAS减少，血清GAS水平降低；黄芪建中汤对脾气虚大鼠有可靠的治疗作用，中、高剂量均为有效用药浓度，尤以高剂量更为理想。 【关键词】 脾气虚证；大鼠；胃窦；胃泌素；G细胞；黄芪建中汤 　　有关脾虚证与胃泌素的关系是近年来研究的热点，比较一致的看法是胃泌素与脾虚证关系密切。但是，在此研究方面，国内外大多局限于血清放免方面的研究，且结论各家报道不一。本研究以三因素复合（大黄法、游泳力竭法、饥饿法）的方法制作脾气虚证大鼠模型，对其血清胃泌素（gastrin，GAS）及胃窦黏膜胃泌素分泌细胞（G细胞）进行比较研究，从神经内分泌与免疫细胞化学相结合的角度，来探讨脾气虚证与胃泌素及其分泌细胞的关系。此外，研究设计选用经方黄芪建中汤为工具药对脾气虚证动物模型进行复健，在验证模型成功的基础上，进一步探讨经方治疗该证的可能机制，为进一步临床使用提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物及分组 清洁级Wistar大鼠136只，雌雄各半，体重（180±20）g，鼠龄8周，由浙江中医药大学实验动物中心提供。实验前先饲养观察3天。实验动物随机分为正常组（32只），模型组（32只），黄芪建中汤低、中、高剂量组（各24只）。 　　1.2 药物制备 中药均购自浙江中医药大学中医门诊部。大黄制剂：将生大黄饮片碎成粉，用蒸馏水浸泡，置于50℃水溶6h，去渣取汁；黄芪建中汤药物组成：黄芪9g，白芍18g，桂枝9g，炙甘草6g，生姜9g，大枣12g，饴糖30g。按国家标准进行炮制后，提取加工成水煎剂，低、中、高剂量浓度分别为含生药1.5kg/L、3kg/L、6kg/L。 　　1.3 试剂及仪器 D木糖试剂盒，南京建成生物工程研究所；胃泌素放免试剂盒，北京北方生物技术研究所；兔抗大鼠胃泌素抗体，北京北方生物技术研究所；酶标记HRP二抗，美国DAKO公司；二氨基联苯胺（DAB），北京中山生物技术公司；DK600S型三用恒温水浴箱；PYXDHS35×40隔水式电热恒温培养箱；SN695型智能放免γ测量仪；LX20型Beckman全自动生化分析仪；722型光栅分光光度计；1512型Leitz型组织切片机；OLYMPUS双目显微镜；LEICADMLB偏光摄像显微镜等。 　　1.4 方法 模型组，黄芪建中汤低、中、高剂量组，以三因素复合法复制脾气虚证模型，具体方法如下：①每日上午以3ml/只灌服大黄制剂液，日1次；②每日下午将动物负重—于大鼠尾根部缠绕重量为该大鼠体重10%的保险丝，放入水深50cm、水温20℃的水槽中游泳，以力竭为度—大鼠鼻尖没入水面10秒，日1次。③控制饮食，每日8：00am给食，8：00pm撤食。共21天。造模期间正常组每日上午以3ml/只灌服生理盐水，自由饮食。共21天。实验第22天，从正常组和模型组各随机取出8只大鼠，摘眼球取血，作相关处理后处死。其余大鼠继续实验：正常组、模型组给予生理盐水灌胃3ml/d，用药组分别给予黄芪建中汤低、中、高剂量3ml/d灌胃，共21天。分别于干预后第7、14、21天每组各取大鼠8只，分3次处理。 　　1.5 症状、体征观察 实验全程观测动物的体重，食量，粪便（腹泻、肛门污秽、拉尾排便），毛色，拱背，嗜睡倦怠，扎堆，乏力等情况。比较各组之间症状与体征的区别。 　　1.6 指标检测 全部大鼠眼球取血，分离血清，检测血清木糖浓度、血清肌酸磷酸激酶（CPK）活性、血清GAS。动物解剖后，取胃窦部组织，以EnVision二步法检测胃窦G细胞。G细胞计数：光镜下G细胞显棕黄色，呈带状分布于黏膜中下带，胞浆内有深浅不同的棕黄色或棕褐色颗粒。光镜高倍视野（×400）对每张切片取胃窦部5个视野，读G阳性细胞数，并换算出每mm2面积内G细胞数。 　　1.7 统计学方法 采用统计软件SPSS11.0处理数据，数值用“均数±标准差（x±s）”。 　　2 结果 　　2.1 脾气虚证造模情况 造模大鼠于第2、3天开始泄泻，多为便溏；第6、7天，出现食量减少；10