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小檗碱对肺动脉平滑肌细胞增殖影响 　【摘要】 目的：观察小檗碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响。方法：将组织贴块法培养的大鼠PASMCs随机分为对照组，AngⅡ模型组，小檗碱高、中、低剂量组，硝苯地平组和溶剂组。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测各组PASMCs的生长情况，以流式细胞术检测细胞周期构成比和增殖指数(PI)，以乳酸脱氢酶(LDH)法检测小檗碱对细胞的毒性作用。结果：小檗碱可明显降低Ang Ⅱ诱导PASMCs的增殖能力，使PASMC3的G0/G1期构成比显著升高(Plt;005)，PI显著下降(Plt;005)，且对PASMCs释放LDH无影响。结论：小檗碱能抑制AngⅡ诱导的PASMCs增殖，且与细胞毒性作用无关。 【关键词】 血管紧张素Ⅱ 肺动脉平滑肌细胞 肺动脉高压 小檗碱 增殖 ［Abstract］Objective：To investigate the effect of berberine on proliferation of pulmonary artery smooth muscle cells(PASMCs)in rats. Methods：PASMCs cultured by tissue_sticking method were randomly divided into control，model，berberine(105～107?mol/L)，nifedipine，and vehicle groups. The cells proliferation abilitiy was determined by mono_nuclear cell direct cytotoxicity assay. The cell cycle was analyzed by flow cytometry. Results：Berberine significantly inhi_bited the proliferation of PASMCs，and up_regulated significantly the constituent ratio of PASMCs G0/G1 cell cycle，and down_regulated proliferation index. Conclusion：Berberine antagonizes the proliferation of PASMCs induced by angiotensin Ⅱ. ［Key Words］angiotensin Ⅱ；pulmonary artery smooth muscle cell；pulmonary hypertension；berberine；proliferation 肺动脉高压的发病机制尚不十分清楚，目前亦无满意的治疗方法。它的两大基本病理改变是肺血管收缩和肺血管平滑肌构型重建，因此，抑制肺血管收缩，改善肺循环血流动力学以及阻止肺血管平滑肌细胞增殖、增强是治疗其关键［1～3］。钙拮抗剂(硝苯地平等)是近年来临床常用的抗肺动脉高压药物，与在逆转肺动脉高压时血管构型重建方面的机制和抑制细胞内游离Ca2+浓度的增高有关。小檗碱是一种异喹啉生物碱，能抑制小肠黏膜分泌，扩张血管，抗血小板凝集及改善肺缺血再灌损伤等。它也是一种钙拮抗剂，能抑制神经细胞、心肌细胞、平滑肌细胞等细胞内游离Ca2+浓度的增高［1～4］。有报道，平滑肌细胞的增殖与细胞内游离Ca2+浓度的增高有关，且平滑肌细胞的异常分化与增殖是血管重构，肺动脉高压等发生、发展的基础。本实验旨在研究小檗碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响。 1材料与方法 11实验动物 SD大鼠［广州第一军医大学动物中心提供］12只，雌雄不拘，体质量200～250?g。 12药品及器材 小檗碱，硝苯地平(上海第十七制药厂，中国。实验前用DMSO溶解配成)，AngⅡ(Sigma公司，美国)，胎牛血清，M199培养基、胰蛋白酶(Sigma公司，美国)，凯基MTT细胞增殖检测试剂盒以及细胞周期检测试剂盒(凯基生物科技发展有限公司，中国)；乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，中国)；倒置相差显微镜(上海光学仪器厂，中国)；超净工作台(苏州净化设备有限公司，中国)；CO2 培养箱(Thermo Forma公司，美国)，multiskan spectrum酶标仪(Thermo Labsystem公司，芬兰)；FACSCalibur流式细胞仪(Becton Dickinson公司，美国)。 13大鼠PASMCs制备 大鼠PASMCs制备见参考文献［5，6］