布地奈德吸入对慢性阻塞性肺病大鼠肺功能及血清细胞因子影响.docVIP

布地奈德吸入对慢性阻塞性肺病大鼠肺功能及血清细胞因子影响 　 作者：王静 李红艳 米东辉 王江滨 【摘要】 目的 观察布地奈德雾化吸入对慢性阻塞性肺病大鼠肺功能及血清细胞因子的影响。方法 将雌性Wistar大鼠30只随机分为对照组、吸烟组、布地奈德组，每组10只。对照组常规饲养，不做任何处理;吸烟组及布地奈德组烟熏并联合气管内滴入脂多糖1个月建立吸烟致大鼠COPD模型。布地奈德组建立COPD模型后1个月雾化吸入布地奈德4 ml /只(0.5 mg/ml)，1 次/d，共1个月。实验结束后采用大鼠肺功能仪对每组大鼠进行肺功能检测，采用ELISA 法测定血清中 IL6、IL8含量。结果 吸烟组与正常组比较0.3 s用力呼出气量占用力肺活量百分比(FEV0.3/FVC)、动态顺应性(Cdyn)降低，吸气阻力(Ri)、呼气阻力(Re) 升高;布地奈德组较吸烟组FEV0.3/FVC、Cdyn、Ri和Re均明显改善(Plt;0.05)。吸烟组血清中IL6、IL8分别为(200.9±4.1) pg/ml、(26.4±0.8) pg/ml,正常组分别为(95.0±1.3)pg/ml、(21.9±0.9)pg/ml,两组比较均有显著性差异(Plt;0.001) 。布地奈德组血清中IL6、IL8 为(150.4±1.430)pg/ml、(24.9±1.197) pg/ml ，与吸烟组比较有显著性差异(Plt;0.001)。结论 布地奈德可逆转吸烟引起的慢性阻塞性肺病大鼠血清IL6、IL8水平升高,可改善慢性阻塞性肺病肺功能。 【关键词】 慢性阻塞性肺病;细胞因子;肺功能;糖皮质激素 慢性阻塞性肺病(COPD)是慢性气道炎症性疾病，多种炎性细胞及其释放的多种细胞因子参与了其炎症反应过程。减弱全身炎症效应以及靶向治愈肺部炎症可否降低COPD并存病的死亡风险是COPD新疗法的研究。糖皮质激素作为一种抗炎药物可以减轻气道炎症反应，但对COPD的疗效仍有争议〔1〕。本研究着重观察雾化吸入布地奈德对COPD大鼠T淋巴细胞因子白细胞介素6(IL6)、IL8及肺功能的影响，探讨糖皮质激素在COPD 中的治疗作用及可能机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 11周龄雌性Wistar大鼠30只，体重230～250 g(由吉林大学白求恩医学部实验动物中心提供，动物合格证号：20080005)，按2级动物条件分笼饲养，饲喂消毒食物及消毒水，适应性饲养1 w。随机分为正常对照组、吸烟组、布地奈德组，每组10只。 　　1.2 方法 　　1.2.1 仪器及试剂 AniRes2003 动物肺功能分析系统为北京贝兰博科技有限公司产品，IL6及IL8试剂盒由上海锐聪科技发展有限公司提供，脂多糖(LPS)为Sigma公司产品，布地奈德由阿斯利康提供，多功能真彩色病理图像分析系统为Nikon microphotFXA产品。 　　1.2.2 模型的制备及治疗方法 模型制备参照文献〔2〕方法。吸烟组及布地奈德组大鼠分别于第1、14天气管内滴入脂多糖，第2～13天、第15～28天参照文献〔3〕方法自制熏烟箱，每天给予持续吸入新鲜的香烟雾1 h，每天2支/只，每天熏烟后立刻在5℃冷空气刺激1 h。模型制备后1个月布地奈德组大鼠给予雾化吸入布地奈德4 ml/只(0.5 mg/ml)，每天1 次，共1个月。 　　1.2.3 肺功能检测 实验结束后处死大鼠前禁食水12 h，以10%乌拉坦18 ml/ kg 麻醉大鼠后，气管插管，放入体描仪，采用AniRes2003动物肺功能分析系统测定0.3 s用力呼气容积占用力肺活量百分比(FEV0.3/FVC%)、吸气阻力(Ri)、呼气阻力(Re)、动态肺顺应性(Cdyn)。 　　1.3 标本的采集及观察 肺功能测定结束后开胸取大鼠右下肺，用10%甲醛灌注固定，常规石蜡包埋制片，HE染色，光镜观察。应用多功能真彩色病理图像分析系统分别测量平均肺泡数(MAN)、肺平均内衬间隔(Lm)、支气管壁厚/外径。MAN：计数每个视野内的肺泡数,除以此视野的面积即为MAN，其数值反映肺泡密度，每例标本测10个视野，求平均值;Lm：在显示器视野中央划“十”字交叉线，计数通过该交叉线的肺泡隔数，除以十字线的总长度即为Lm，其数值反映肺泡平均直径，每例标本测8个视野,求平均值;支气管壁厚/外径:测量周径lt;1 000 μm的小支气管横截面的壁厚/外径比值，每例标本测8个小支气管，求平均值。 　　1.4 IL6及IL8含量测定 抽取大鼠动脉血液，以1 500 r/min离心5 min，取上清液-70℃保存，采用ELISA法进行检测，操作按试剂盒说明书进行。 　　1.5 统计学处理 采用Graphpad Instat 3 (GraphPad S