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双水相萃取 双水相分离理论 双水相体系建立的操作方法 双水相萃取技术的应用 双水相萃取技术的研究进展 一、双水相分离理论 双水相的形成 相图 物质在两相中的分配 双水相系统的类型 （1）高聚物-高聚物体系，以聚乙二醇PEG/ Dextran（葡聚糖）和PEG／Dextran硫酸 盐体系为常见；(分子间的斥力） （2）高聚物-低分子物质体系，以高聚物/无机盐 体系为常见，如PEG/硫酸盐、PEG/磷酸盐 等（盐析作用）。 双水相组成的选择依据—相图 物质在两相中的分配 分配系数 1. 静电作用 表面自由能的影响 表面电荷的影响 2. 疏水作用 氨基酸在其等电点处的分配系数 蛋白质的疏水性 盐对疏水性的影响 盐浓度增加引起相间电位变化的影响 影响分配平衡的因素 1）成相聚合物 成相聚合物的相对分子量降低、浓度升高有利于增大溶质的分配系数。 3）pH值的影响 pH值的变化会导致组成体系的物质电性发生 变化,也会使被分离物质的电荷发生改变,从而影 响分配的进行。例如在PEG/盐组成的体系中,通 常可在相当小的pH变化范围内,使蛋白质在其中 的分配系数有很大的改变。 4）外加电场的影响 当在两相分界的垂直方面上加上电场时由于 电位差增加而使分配系数发生改变 如用PEG8000 /DextranＴ 500体系分离肌红蛋白,在外加48.1 Ｖ/cm的电场强度40 min后,分配系数Ｋ从0.81变 为38.7,上相回收率从44.7%增高到98.0% 。 5) 温度的影响 由于温度的变化影响液相的物理性质，如黏 度和密度，影响待分离物在两相中的分配。此外， 成相聚合物对蛋白质有稳定化作用，在室温操作 活性回收率依然很高。 二、双水相体系建立的操作方法 1　双水相体系组成成分的选择 分配系数 经济性 高聚物对目的成分的影响 如各种细胞、噬菌体等的分配系数或大于l00，或小于0.01；蛋白质(如酶)的分配0.1至10之间；无机盐的分配系数一般接近于1.0。这种不同物质分配系数的差异，构成了双水相萃取分离物质的基础。 2 双水相体系的系线和相图的制作 在双水相体系组成成分确定以后,首先要配制双水相 体系, 而双水相体系的配制依据是体系的相图, 所以, 在配制双水相体系以前应先把该体系的相图(包括系线) 制作出来 以 PEG/(NH4)2SO4 体系为例: 从 PEG/(NH4)2SO4 的量可得出体系组成的质量分数,混合分相后,测出上相 和下相中PEG、(NH4)2SO4的含量, 由此可得到3个点即加 料点、上相点和下相点,然后调整PEG或(NH4)2SO4的量,重 将得到的所有的上相点和下相点在坐标图上用光滑曲线 连接起来组成双节曲线,而每1次的加料点、上相点和下 相点的连线则为系线。 三、双水相体系的应用 传统双水相体系的特点 优点：分离条件温和，质量传输快，易操作，可调节 缺点：高聚物黏度较大，难挥发，成本高，需要反萃取,使后续的分离较为麻烦，不适宜大规模工业化生产。 新型双水相萃取的应用 大宗发酵产品的双水相萃取（1,3-丙二醇和2,3-丁二醇） 蛋白的双水相萃取（血清白蛋白） 天然产物有效成分的双水相萃取（薯蓣皂苷、白藜芦醇、丹酚酸B和花青素等） 传统的分离1,3-丙二醇手段 絮凝法：壳聚糖絮凝发酵液中菌体 缺点：体系受发酵液组成影响较大 醇沉法: 通过乙醇沉降发酵浓缩液，去除其中生物大分子 缺点：乙醇用量较大，且沉降过程中1,3-丙二醇损失 硫酸铵沉降法: 通过硫酸铵沉降去除发酵液中生物大分子 缺点：盐用量较多，1,3-丙二醇沉降过程中有损失 乙醇/硫酸铵体系 发酵液中1,3-丙二醇的分配系数和回收率分别可达 4.77和93.7% 甲醇/磷酸氢二钾体系 发酵液中1,3-丙二醇的分配系数和回收率分别可达 13.03和96.2% 碳酸钠/乙醇体系 发酵液中1,3-丙二醇的分配系数和回收率分别可达 7.03和93.8% 结论 首次将亲水性有机溶剂/无机盐双水相体系用于发酵液中1,3-PD的分离，1,3-PD主要分配在上相中。对多种双水相体系萃取能力进行了测定，并确定了磷酸氢二钾/甲醇体系、硫酸铵/乙醇体系、碳酸钠/乙醇体系具有较好的萃取效果。 在碳酸钠/乙醇体系中，下相能够代替氢氧化钠作为碱液调节发酵过程的pH，并获得了更高浓度的目标产物，从而达到回收下相中盐和甘油的效果。 异丙醇/硫酸铵双水相体系的相图