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题名页 随机聚合酶链反应法检测细菌方法学的建立 张山，李思，王文武 微生物与感染编辑部，上海200032 基金项目：国家高新技术研究发展计划（863）（2009ZZ06…） 第一作者：张山，详细联系方式（电话、E-mail） 通作者：王文武，详细联系方式（电话、E-mail） 随机聚合酶链反应法检测细菌方法学的建立 ，李思2，王文武1 1.微生物与感染编辑部, 上海 200032；2.复旦大学遗传所, 上海 200433 摘要为证实乙型肝炎病毒（hepatitis B irus，HBV）3022nt-1787nt缺失突变体编码蛋白TSX（源于DNA聚合酶读码框，T代表TP区，S为部分缺失的pacer区，X为截短的X蛋白）具有抗(干扰素（IFN-(）作用并确定其功能区域，首先以PCR）扩增获得TSX全长及片段TS（含TP区及部分缺失的pacer区），并克隆于pcDNA3.1/HisC载体。重组载体以FuGENE6转染Huh7肝细胞，48后裂解细胞，通过融合表达的多肽表位抗体，以estern blot）证实目的蛋白可在Huh7肝细胞中表达。重组载体及空载体pcDNA3.1/HisC分别与IFN-(反应报告载体p6-16CAT按分子数5:1、10:1、15:1、30:1 共转染Huh7肝细胞，转染后48给予终浓度为100 IU/ml 的IFN-(2a刺激，作用24后裂解细胞，ELISA）检测胞内氯霉素乙酰基转移酶CAT）含量结果显示，与空白载体相比，随着TSX及TS重组表达载体转染量的递增，Huh7胞内CAT值逐渐降低n＝6，0.05），但TSXTS之间无显著差异(n＝6，0.05)。本研究证实 HBV 3022nt-1787nt缺失突变体编码的TSX蛋白可抑制Huh7细胞对IFN-(的反应性，其活性与其N端TP及部分缺失的Spacer区有关。 关键词海分枝杆菌；转座子突变；斑马鱼；肉芽肿 ─────────────── 基金项目：国家高新技术研究发展计划（863）（2009ZZ06…） 通作者王文武 Corresponding autor. WANG Wen-Wu, E-mail: jmi@fudan.edu.cn Establishment of a random PCR method for detecting bacteria ZHANG Shan1, LI Si2, WANG Wen-Wu1 1. Journal of Microbes and Infection, Shanghai 200032, China; 2. Institute of Genetics,Fudan University, Shanghai 200433, China Abstract： The purpose of the current study is to investigate the anti-IFN-( effects and to determine the functional region of the novel protein TSX encoded by the 3022nt-1787nt deletion mutant of hepatitis B virus (HBV). Regions coding for TSX (in frame with the opening reading frame of DNA polymerase, in which T stands for terminal protein, S for partially deleted spacer region, and X for truncated X protein) and TS (N-terminal of TSX containing terminal protein and partially deleted spacer region) were amplified by means of PCR and cloned into the pcDNA3.1/HisC vector separately. The recombinant vector was transfected into Huh7 hepatocytes individually by FuGENE6 transfection reagent, and the expression of the fusion protein was verified by Western blot analysis. The recombinant or empty vector was co-transfected to Huh7 hepatocytes with IFN