核酸理化性质和研究方法.pptVIP

一、核酸的理化性质 二、核酸的水解 三、核酸的紫外吸收 四、核酸的变性复性与分子杂交 五、核酸的分离纯化 六、核酸一级结构测定 三、核酸的紫外吸收 DNA变性 核酸的分子杂交 1、DNA的片段越大,复性的速度越慢; 2、DNA的浓度越高,复性的速度越快; 3、DNA的重复序列越多,复性的速度越快; 4、溶液的pH过高或过低,复性的速度均会降低; 5、适当增高溶液的离子强度,复性的速度会增高。 影响复性速度的因素： 核酸的分子杂交 两条来源不同但有互补关系的DNA单链, 或DNA单链与RNA分子,在去掉变性条件后互补的区段能够退火形成双链DNA分子或DNA/RNA异质双链的过程称为分子杂交. Southern杂交：样品DNA用限制性内切酶切割成一定大小的片段，进行变性凝胶电泳，将凝胶电泳形成的DNA区带转移到膜上再进行杂交，这种技术称作~。 Northern杂交：将RNA凝胶电泳形成的区带转移到膜上再进行杂交称作~。 Western印迹：将蛋白质凝胶电泳形成的区带转移到膜上再与酶标抗体进行特异反应称为~。 Eastern印迹：将蛋白质等点聚焦形成的区带转移到膜上再与酶标抗体进行特异反应称作~。 核酸的分子杂交 五、核酸的分离纯化 策略： DNA的分离提取：防止剪切 RNA的分离提取：防止酶解 方法： 超速离心、柱层析、凝胶电泳 核酸的分离、提纯和定量测定 1 DNA的分离 用1mol/L的NaCl制备组织匀浆,离心除去组织残渣,多次用苯酚处理使蛋白质变性,每次处理后离心取上层水相,最后加2倍体积的乙醇沉淀出DNA。 2 RNA的分离 由于RNA酶存在广泛,且十分稳定,破碎细胞时要加入胍盐破坏RNA酶,试剂要用0.1%的DEPC（焦碳酸二乙酯）配制,器皿要高压灭菌或用0.1%的DEPC处理,多次用苯酚或氯仿处理使蛋白质变性,每次处理后离心取上层水相,mRNA可用寡聚dT-纤维素亲和层析从总RNA中分离。 3 核酸含量的测定法 常用的方法是测定260nm的消光度,用公式计算核酸的含量。 核酸的含量也可以用定磷法测定。 DNA的含量可以用二苯胺显色法测定。 RNA的含量可以用地衣酚显色法测定。 4、核酸的超速离心 超速离心可以分离超螺旋DNA（密度大） ,线性DNA（密度小）和闭环DNA（密度居中）。也可以分离RNA。 5、核酸的凝胶电泳 松弛型，OC, Open circular DNA 超螺旋, CCC, covalently-closed circular DNA 从细菌抽提得到的质粒DNA 样品中不含线状DNA 六、核酸一级结构序列测定 1、 DNA的化学法测序 2、 DNA的酶法(末端终止法)测序 * * * 本章小结 1. 核酸的基本结构、核苷酸的组成成分 2. 核酸的一级结构 3. DNA的高级结构：二级、三级 Watson Crick的DNA双螺旋结构特点 4. RNA的高级结构：二级、三级 RNA的类型与功能、tRNA的二级结构、核糖体亚基组成、原核与真核生物mRNA一级结构异同 课程测验 1. 胸腺嘧啶除了在DNA中出现外，还出现在____(13年34题) : A. tRNA; B. mRNA; C. 5S rRNA; D. 18S rRNA. 2. 与氨基酸结合的tRNA部位是____(12年36题) : A. 3’末端; B. 5’末端; C. N-末端 ; D. C-末端. 3. 下列核苷中，在真核生物tRNA和mRNA中都存在的是____(12年24题) : A. 胸腺嘧啶核苷; B. 腺嘌呤核苷; C. 二氢尿嘧啶核苷 ; D. 假尿嘧啶核苷. 课程测验 4. 一段双链DNA包含1000个碱基对，其组成中G+C=58%，那么该双链DNA中T的含量是____(10年25题) : A. 58%; B. 42%; C. 29%; D. 21%. 5. 下列DNA模型中，属于左手螺旋的是____(09年24题) : A. Z-DNA; B. C-DNA; C. B-DNA ; D. A-DNA. 2016年10月6日，2014年诺贝尔奖生理学或医学奖揭晓，拥有美英双重国籍的科学家约翰·奥基夫、挪威科学家梅—布里特·莫泽和爱德华·莫泽夫妇共获殊荣，以表彰他们对大脑“定位系统”的重大发现。 2014诺贝尔生理学或医学奖 第十三章 核酸的理化性质与研究方法 2015年农学门类联考考试大纲考点 (一) 核酸的种类和组成单位 (二) 核酸的分子结构 1．DN