RAS阻断剂对糖尿病大鼠血管早期动脉粥样硬化的形成的影响.pdfVIP

第一章材料和方法 第一章材料和方法 1材料与仪器 胆固醇、胆酸钠、链脲佐菌素(STZ)：祁东同信生化厂 无水乙醚： 青岛大学医学院附属医院 EliVision试剂盒：福州迈新生物科技有限公司 兔抗大鼠核转录因子、细胞间黏附分子多克隆抗体：武汉博士德生物工程有限公司 贝那普利(洛丁新)：北京诺华公司 厄贝沙坦(安博维)：赛诺非一安万特公司 血糖测定：日立自动生化仪(葡萄糖氧化酶法) 血浆胰岛素测定：CIS(法国)放免(竞争法)试剂盒 血甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇测定：日立自动生化仪。 脂联素测定：美国ADL公司脂联素酶联免疫试剂盒。 彩色病理图文分析系统：德国OPTONVIDAS图文分析系统 健康雄性清洁级SD大鼠40只，由青岛大学医学院实验动物中心提供，8周龄，体 重1802209，标准化饲养房笼子喂养，每笼4只，每天光照12小时。 2方法 2．1动物分组及AS模型制作 应用高糖高脂饮食制作糖尿病大鼠动脉AS模型乜1：将40只大鼠，随机分为4组，A 组为正常对照组，B组为2型糖尿病组，C组为贝那普利组，D组为厄贝沙坦组，每 组10只。B、C、D组喂食高糖高脂饲料(质量分数：猪油10％，蔗糖20％，胆固醇 个月后大鼠腹腔注射25 mol／L枸橼酸缓冲液配成)， mg／kgSTZ(以pH4．2的O．1 J下常对照组仅注射枸橼酸缓冲液作对照制作模型；贝那普利组给予贝那普利 A、B两组给予生理盐水灌胃作对照。所有大鼠均分笼按清洁级动物饲养，整个试验 周期为16周。 2．2检测指标和方法 3 青岛大学硕士学位论文 2．2．1血脂、血糖、胰岛素检测实验结束时经左心取空腹血标本，离心(3000 平。BG测定采用葡萄糖氧化酶法，血浆PGI测定采用法国CIS放免试剂盒(竞争法)。 血TC、TG、LDL测定于同立自动生化仪上进行； 2．2．2病理形态学检查大鼠用1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，左胸切口， 经左心室用O．85％氯化钠灌洗，至右心耳流出液清亮为止。立即取胸主动脉剪取 同一部位约O．5cm长血管段固定于10％缓冲甲醛液过夜，石蜡包埋，横断面连续 切片，厚4um，分别用作苏木精一伊红染色，观察病理形态学改变。 2．2．3血清脂联素浓度检测经大鼠内眦静脉抽取静脉血3ml，室温下静置3h， 素浓度。 2．2．4免疫组化染色检测NF-KB、VCAM-1表达取病变部位血管等距切分4～ u 5段，1096中性缓冲甲醛固定，石蜡包埋。血管标本横截面连续切片，厚度4m，间 隔100la B、VCAM一1免疫组 m再次切片，共切3个层面。用E1iVision法进行NF-K 化染色：3％过氧化氢灭酶，微波修复，一抗稀释度均为1：150，室温孵育lh，DAB 显色，苏木素复染。NF-KB抗体以血管内皮细胞核内出现棕黄色颗粒物质为阳性， VCAM-I以细胞膜和细胞质黄染为阳性。计数高倍镜下同一切片内全部阳性细胞及 B与VCAM一1的阳性率。应用 内皮细胞数，以阳性细胞占内皮细胞百分比表示NF-K 彩色病理图文分析系统计算病理切片组织中阳性染色面积与视窗面积的百分比。 3统计学处理 所有数据均以X±s表示，多组用方差分析与两两比较用q检验。使用SPSSll．0 及PPMS1．5统计学软件【3】进行数据处理，P0．05为差别有统计学意义。 4 第二章实验结果 第二章实验结果 1血糖、胰岛素、血脂检测结果 模型制作成功瞄’。 q=15．66--16．57，P0．01)、TG(F=182．56 q=3．495．53，P0．01)较正常对照(NC)组显著升高。 无显著差异一(F=O．25