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Midkine及肿瘤关系探究进展 　 【关键词】 MK；基因表达；肿瘤 Midkine（MK）是1988年Kadomatsu等用差异杂交的方法在视黄酸诱导的小鼠胚胎肿瘤细胞系HM1细胞cDNA文库中筛选出的一种新基因。它与PTN（多效营养因子，又称肝素结合相关因子）基因结构很相似，共同组成MK家族。二者均由5个外显子和4个内含子组成，其中外显子Ⅰ为非翻译区，外显子Ⅱ编码信号肽和N端几个氨基酸残基，Ⅲ和Ⅳ编码核心区域氨基酸残基，Ⅴ编码C端氨基酸残基，只是外显子Ⅴ和内含子大小不等。人的MK基因位于ｐ11.2，该基因上游有视黄酸应答因子的位点、IgG增强子元件、AP1和NFkB结合位点、ＷＴ1(Wilm′s肿瘤抑制基因产物 1)的作用位点(5′GCGGGGGGCG3′)及固醇类/甲状腺激素受体结合位点，这些位点均与基因的表达调控相关，见图1。 图1 MK基因上游的调控位点和外显子I的示意图 1 MK基因表达与肿瘤的关系 MK高表达于许多肿瘤组织中，Tsutsui等用Northern Blot法发现MK在Wilm’s肿瘤、肝细胞癌、胃癌、胰腺癌、结肠癌及食管癌中较相对的癌旁组织均有不同程度的高表达；O’Brien等用核酸酶保护分析法发现，MK在膀胱癌中有高表达；Nakanishi等运用Northern Blot、原位杂交及免疫组化技术研究表明，卵巢癌中MK的表达水平也高； Miyashiro等运用RTPCR、Northern Blot及免疫组化等方法检测到乳腺癌中高表达的MK。随后，在前列腺癌、肺癌、脑肿瘤、甲状腺乳头状瘤、子宫颈癌[1]和大量的消化道、消化腺肿瘤中也发现高表达的MK。 近年来对MK表达水平的研究结果表明，MK的表达与肿瘤发展的进程及严重程度密切相关，国外Mishima等用Northern和Western印迹法检测发现MK在高度恶性的星形细胞瘤组织中的表达显著高于低度恶性肿瘤组织；O’Brien等发现在膀胱癌中MK的表达水平与癌的发展有关，尤其在浸润性膀胱癌中，MK的高表达程度与预后不良密切相关。国内殷正丰等[2,3]应用免疫组织化学染色和Western印迹等方法研究发现原发性肝细胞癌（HCC）的MK表达增加，可能与肝内侵袭、转移和HCC的血行播散有关；此外，Konishi等[4]的研究还发现，除了在恶性肿瘤中有高频率、高程度的表达外，MK在癌前病变组织中也有高表达。他们对15例潜伏期前列腺肿瘤及正常前列腺组织进行免疫组化分析研究显示，80%的潜伏期肿瘤有MK高度表达，而正常组织不表达或仅微弱表达MK，由此认为检测组织中MK表达水平可用于肿瘤的早期诊断。 肿瘤患者的血液和尿液中也存在MK。2000年Ikematsu等[5]对10种肿瘤疾病患者血清中MK的含量进行了研究，发现MK在肿瘤患者血清中的含量明显增加，87%的肿瘤患者血清中MK水平高于0.5 ng/ml，而对照组血清中仅为0.154 ng/ml，肿瘤切除后，血清中MK的含量明显下降。Shimada等[6]研究认为，血清中MK含量的增加可作为食管癌的诊断标记。Obata等[7]报道，胃癌患者血清中MK含量显著提高，而且晚期癌的血清MK含量高于早期瘤。Ikematsu等[8]2003年又报道了，胃癌、直肠癌、肝癌、胆管癌、胰腺癌、脑癌、膀胱癌、肾癌及甲状腺癌等肿瘤患者尿液中的MK含量也显著增高，II期胃癌和直肠癌的阳性率高于I期。由此可见，通过检测血清或尿液中MK的水平进行临床肿瘤诊断和分期是可能的。 2 MK表达产物的定位 关于MK在细胞中的定位目前结论并不一致，有报道认为它们存在于细胞质，也有报道认为存在于细胞核、核仁。罗祥基等应用免疫组织化学与原位杂交的方法研究发现，MKｍRNA及蛋白的阳性信号聚集于HCC肿瘤细胞的细胞质，并在HCC细胞外组织中的血管密集处MK表达尤为明显；目前已发现的细胞表面的MK受体包括syndecan 家族成员、 蛋白多糖受体型酪氨酸激酶f(PTPζ)、一种跨膜的低密度脂蛋白 (LDL)受体相关的蛋白(LRP)以及间变性淋巴瘤激酶(ALK)等。2005年Dai等[9]通过使用GFP作为示踪分子研究发现，MK特异的定位于HepG2细胞的细胞核和核仁，并通过点突变和缺失突变比较分析成功地确定了MK细胞核定位的核心区域为K79R81、K86K87和C端尾部，对于MK核仁定位，C端最为关键，其次为N端尾部、K79R81和K86K87。 3 MK致瘤的分子机制 目前的研究表明MK与肿瘤形成相关的分子机制主要有诱发瘤细胞的发生、促纤溶和具有细胞趋化作用、促进肿瘤血管的形成、增强肿瘤细胞的耐药性以及缺失型MK（tMK）表达的出现等几种形式。 3.1 瘤细胞的发生 主要包括诱导细胞的转化、抗细胞凋亡和促有丝分裂。首先，