乙酰基转移酶2基因多态性及大肠癌遗传易感性相关性探究.docVIP

乙酰基转移酶2基因多态性及大肠癌遗传易感性相关性探究 　 作者：骆瑞珍，张振亚，于跃明，何陆军，乔芳 【摘要】 目的:探讨N乙酰基转移酶2(NAT2)基因多态性和大肠癌遗传易感性的关系。方法:采用PCRRFLP方法调查NAT2基因多态性在大肠癌组和对照组的分布，对患者临床资料进行统计分析。结果:基因型WT/M2在大肠癌组明显高于对照组（χ2=10.22，Plt;0.01）。快速型和慢速型在大肠癌组和对照组的分布差异无显著性（χ2=0.13，Pgt;0.05）。吸烟者在大肠癌组的出现频率显著高于对照组，χ2=5.42，Plt;0.05。高吸烟指数者中，WT/M2基因型在大肠癌组的分布频率显著高于对照组，χ2=5.45，Plt;0.05。患者中WT/M2基因型频率在≥60岁组高于lt;60岁组，差异有显著性（χ2=4.69，Plt;0.05），在病理类型、性别、淋巴结有无转移、肿瘤浸润广度等方面差异无显著性。结论：NAT2 WT/M2基因型可能是大肠癌发生的高危因素，该基因型的个体吸烟剂量大、高龄可能增加大肠癌发病风险。 【关键词】 大肠癌；N乙酰基转移酶2；基因多态性；限制性片段长度多态性 　　N乙酰基转移酶2（NAT2）直接影响杂环胺类物质在人体内的代谢，推测和大肠癌有关。我们采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCRRFLP）方法进行病例对照研究，探讨NAT2基因多态性和大肠癌遗传易感性的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 随机选取2005年11月至2006年11月河北医科大学第四医院病理确诊的大肠癌患者83例，年龄29岁~74岁；男46例，女37例。对照组83例排除肿瘤、遗传性疾病、结缔组织病等疾病，与大肠癌患者同民族、同性别，职业、年龄、居住史具有可比性，年龄26岁~73岁；男46例，女37例，实验对象均为血缘无关个体，抽取静脉血3 ml，EDTA抗凝送检。 　　1.2 方法 　　1.2.1 采用PCRRFLP方法调查NAT2基因多态性 按照PELFREEZ试剂盒操作说明提取DNA。PCRRFLP方法进行NAT2基因分析：上游引物：5，GGA ACA AAT TGG ACT TGG，下游引物：5，TCT AGC ATG AAT CAC TCT GC。PCR反应体系为40 μl（包括基因组DNA 50 ng~200 ng，引物20 mM，dNTP 1.25 mM，MgCl2 225 mM，1×PCR缓冲液，Taq酶5 U）。循环参数设定：95℃预变性5 min；95℃ 1 min，57℃ 1 min，72℃ 1.5 min循环35次，72℃延伸5 min。扩增之后，分别取15 μl PCR产物以KpnI酶（M1 allele）、TaqI酶（M2 allele）、BamHI酶（M3 allele）、MspI/AluI酶（M4 allele）进行限制性酶切，酶切产物在琼脂糖凝胶中电泳1 h~3 h，用凝胶成像分析系统拍照分析。 　　1.2.2 调查大肠癌组临床资料 如吸烟、年龄、性别、淋巴结转移、肿瘤浸润广度、病理分级等。 　　1.3 统计学处理 应用SPSS 10.0软件，以χ2检验等进行统计学分析，检验水准α=0.05，以比值比（OR）表示相对危险度。 　　2 结果 　　2.1 NAT2基因多态性与大肠癌的相关性 　　2.1.1 NAT2各种基因型在大肠癌组和对照组的分布 各种基因型分布如表1所示，WT/M2在大肠癌组明显高于健康人群，差异具有显著性。 　　表1 大肠癌组与对照组NAT2基因型分布比较（略） 　　2.1.2 快、慢速基因型在大肠癌组和对照组的分布 如表2所示，快速基因型在两组的分布差异无显著性。 　　表2 大肠癌组与对照组NAT2快速基因型分布比较（略） 　　注：χ2=0.13，Pgt;0.05。 　　2.1.3 NAT2各种基因型与大肠癌易感性的相关性 以基因型WT/WT的危险度OR为1，则基因型WT/M2　OR为3.21，95%的可信区间为（1.33～7.76），而其余各种基因型的95%可信区间均包括1，见表3。 　　表3 NAT2各基因型与大肠癌的相关性（略） 　　注：χ2=1,2,3,4 　　2.2 大肠癌患者临床资料分析 　　　2.2.1 NAT2基因型和吸烟、大肠癌易感性的关系 吸烟者在大肠癌组的出现频率为59.04%（49/83），显著高于健康组40.96%（34/83），χ2=5.42，Plt;0.05。吸烟状况通过吸烟指数(SI)评价。SI=每天吸烟支数×吸烟年数。SI≤400为低吸烟指数组，SIgt;400为高吸烟指数组。高吸烟指数者中，WT/M2基因型在大肠癌组的分布频率显著高于对照组。低吸烟指数者中，WT/M2基因型在两组的分布无明显差异，见表4。