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免疫组化联合检测诊断前列腺良恶性疾病探究 　作者：李松远，廖志武，李莹，黄秋霞;【摘要】; 目的 探讨CK34beta;E12、P63、P504s联合免疫组化染色在前列腺良、恶性病变鉴别诊断中的意义。方法 采用免疫组化方法，观察CK34beta;E12、P63、P504s在不同前列腺疾病中的表达情况。结果 36例前列腺病变中，28例良性前列腺增生及低度的不典型增生（PIN）的腺泡及导管周围可见连续的CK34beta;E12和 P63呈阳性，少数呈间断表达。特别以P63染色明显，但P504s染色皆呈阴性。高度不典型增生（PIN）CK34beta;E12、P63染色呈不连续表达或阴性，而增生的腺上皮，部分细胞P504s呈弱（+）或（+）；非典型腺瘤性增生，CK34beta;E12、P63呈（+）、P504s（－）；前列腺癌8例中7例CK34beta;E12、P63染色呈（－），1例显色局灶性（+），但P504s均呈（+）。结论 P63、CK34beta;E12、P504s联合检测可明显提高前列腺癌诊断的正确性。 【关键词】; 前列腺疾病；免疫组化；诊断，鉴别 　随着我国人口步入老龄化，前列腺疾病是临床极为常见的老龄男性疾病。前列腺癌的发病率呈逐年上升趋势。然而在临床病理诊断工作中，常常遇到前列腺良性增生与前列腺癌的鉴别难题，特别是对于细针穿刺前列腺活检的病例，病理诊断正确与否直接决定着临床手术方式治疗方案的选择及评估病人的预后等，均值得病理科及临床科室医师去探讨。我院2001～2006年间对传统开放切除前列腺标本21例，气化电切标本8例，细针穿刺标本7例，共计36例进行常规HE染色后，再进行免疫组化联合检测，现报告如下。 　　1; 材料与方法 　　1.1; 材料; 收集我院2001～2006年前列腺传统方法手术切除，气化电切除及穿刺前列腺标本共36例。其中良性前列腺增生28例［包括低度不典型增生(PIN)4例，非典型腺瘤性增生2例］，前列腺癌8例（包括癌旁高度不典型增生1例，低度不典型增生3例），年龄55～80岁，平均68岁。 　　1.2; 方法; 免疫组化染色采用即用型两步法。P63、CK34beta;E12、P504s单抗及两步法试剂（pv－9000试剂盒）均购自福建迈新生物技术有限公司产品，所有抗体均为工作液。详细步骤如下：①石蜡切片脱蜡至水。②蒸馏水冲洗，PBS浸泡5min，采用高压锅抗原修复。③3％双氧水室温孵育25min，以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗，2mintimes;3次。④滴加一抗工作液，37℃孵育2h。⑤PBS冲洗，2mintimes;2次。⑥滴加试剂1，室温孵育20min，PBS冲洗2mintimes;3次。⑦滴加试剂2，室温孵育20min，PBS冲洗2mintimes;3次。⑧DAB显色。⑨自来水充分冲洗，复染、脱水透明、封片。每批染色设置已知阳性对照，阴性对照用PBS替代一抗，DAB显色，苏木素复染。 　　1.3; 结果判断; CK34beta;E12、P504s以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性表达。P63以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性表达。无棕黄色颗粒出现即为阴性表达。 　　2; 结果 　　2.1; P63和CK34beta;E12; P63抗体在前列腺腺体基底细胞胞核特异性着色，而CK34beta;E12则在基底细胞胞质特异性着色，腺体上皮细胞P63、CK34beta;E12表达（－），间质成纤维细胞、血管平滑肌也均（－）。在28例良性前列腺增生病例中，可见大多数良性增生腺泡及低度不典型增生腺管周围呈现连续的P63和CK34beta;E12阳性反应，表明基底细胞完整存在。同时也可见少数的良性腺泡壁CK34beta;E12及P63染色皆呈腺泡壁间断性阳性表达，甚至完全阴性，2例前列腺非典型腺瘤性增生的病例P63及CK34beta;E12染色（+），可见增生的小腺泡周围基底细胞存在。癌旁1例高度不典型增生及3例低度不典型增生CK34beta;E12和P63染色呈程度不同的间断缺失或完全阴性。8例前列腺癌中有7例CK34beta;E12和P63染色均呈（－），1例在癌性增生的腺管壁上CK34beta;E12和P63染色显示间断弱（+），表明基底细胞仍有部分残留。 　　2.2; P504s; P504s为前列腺癌细胞标记物，8例前列腺癌上皮细胞皆呈（+），癌细胞胞质特异着色，而基底细胞正常分泌上皮细胞呈（－）。在28例良性前列腺增生中（含低度不典型增生）皆呈（－）。癌旁高度不典型增生腺上皮细胞部分呈弱（+）或局灶（+）。2例非典型腺瘤性增生病例腺泡上皮均呈（－）。 3; 讨论 ; 　近年来，国内外病理学家用CK34beta;E12对前列腺基底细胞进行标记来判断是否为癌，但由于各种原因，假阳性或假阴