维生素D缺乏及其受体基因FokI位点多态性对脊柱结核易感性的影响.pdfVIP

硕士学位论文 第一章前言 第一章前言 脊柱结核是由结核分枝杆菌引起的特殊感染性疾病，主要累及椎体松质骨， 其发生发展是结核杆菌与机体相互作用的结果。机体感染结核杆菌后是否发展为 脊柱结核，不仅取决于结核杆菌的毒力、数量，还取决于机体对结核杆菌的易感 性及免疫能力。流行病学调查显示，人群中结核杆菌的感染率高达1／3而真正患 脊柱结核的比例却较低，这表明人体对结核杆菌的抵抗力是决定脊柱感染结核杆 菌后是否发病的主导因素。 维生素D为一种脂溶性维生素，其调节钙、磷代谢的作用已经为大家所熟 知，但近年来，一些研究D-s]表明1，25一维生素D3除了上述经典作用外，还具有 其他广泛的非经典作用，是许多生物作用链条上的调节节点。其中维生素D对 肺结核易感性影响的研究已经有较多报道[6,71，表明维生素D缺乏可增加罹患肺 结核的风险；然而维生素D营养状况对脊柱结核发病的影响尚未见文献报道。 遗传因素对于结核发病的影响，很早就引起人们的关注。有研究显示【8】=遗 传背景完全相同的单卵双胞胎结核病的同病率明显高于双卵双胞胎，这一现象表 明遗传因素在机体对结核病的易感性方面起着重要作用[9】。1992年，Morrison D 等人Il叫首次发现在编码维生素D受体(vitamin receptor,VDR)的基因上存在 nucleotide 数个单核苷酸多态性位点(single polymorphism，SNP)，并研究了这些 位点多态性对人群骨密度峰值的影响，发现维生素D受体基因多态性是影响个 体骨密度峰值的重要遗传因素。此后许多学者将这些多态性位点作为一些疾病的 候选基因进行研究【11-14]但对脊柱结核发病的影响目前研究较少【I”。 本课题分别运用聚合酶链反应．限制性片断长度多态性分析(polymerase chainreaction--restriction fragmentlen昏h 核患者(病例组42例)的VDR基因Fok I酶切位点多态性和血清25一羟维生 素D3水平进行检测，以了解它们在两种不同人群中的分布是否存在显著性差异， 从而推测二者对脊柱结核易感性的影响，以期为脊柱结核的防治提供新途径。 硕士学位论文 第二章材料与方法 第二章材料与方法 2．1研究对象 2．1．1研究对象及来源 脊柱结核患者42例(病例组)和健康对照64例(对照组)均选自中南大学 湘雅医院脊柱外科病房及门诊。研究对象均为汉族且相互之间无血缘关系，两组 对象一般资料坦塞!1 2．1．2纳入标准 ①病例组，首次确诊的脊柱结核患者，抗痨治疗不满一周，手术中病理活检 证实为结核病灶：②对照组为健康志愿者，胸片及脊柱平片排除活动性肺结核及 脊柱结核。 21．3共同排除标准 合并下列情形之一者不纳入研究： 活动性肺结核，肝肾功能异常，截瘫， 消化功能异常，长期应用激素，HIV患者，过量饮酒，慢性制动或废用，年龄大 于65岁，神经性厌食，过胖或过瘦，未进行卡介苗接种，接受过脊柱手术，自 身免疫性疾病。 2．2主要试剂及来源 2．2．1提取外周血白细胞基因组DNA试剂 柠檬酸 湖南师大化学试剂厂 柠檬酸钠 湖南师大化学试剂厂 葡萄糖 湖南师大化学试剂厂 75％乙醇 湖南师大化学试剂厂 异丙醇 湖南师大化学试剂厂 全血基因组DNA提取试剂盒 大连宝生物(Takara)工程有限公司 2．2．2PCR试剂 DNA聚合酶 大连宝生物(Tak