应用组织芯片技术探究IGF1在反应性及肿瘤性星形胶质细胞中表达.docVIP

应用组织芯片技术探究IGF1在反应性及肿瘤性星形胶质细胞中表达 　 作者：韩伟，张春庆，戚基萍，李丹阳 【摘要】 目的 探讨IGF1、bcl2和ki67蛋白在星形胶质细胞反应性增生与低级别星形胶质细胞瘤中表达的区别及意义。方法 应用组织芯片和免疫组化染色技术检测正常脑组织、星形胶质细胞反应性增生、低级别（Ⅰ～Ⅱ级）和高级别（Ⅲ～Ⅳ级）星形胶质细胞瘤中IGF1、bcl2和ki67蛋白的表达情况。结果 正常脑组织中三者均为阴性表达；星形胶质细胞反应性增生组中IGF1、bcl2和ki67阳性率分别为28.9%、26.7%、22.2%；低级别星形胶质细胞瘤组中IGF1、bcl2和ki67阳性率分别为63.8%、50.0%、70.2%；高级别星形胶质细胞瘤组中阳性率分别为88.9%、79.2%、95.2%。IGF1、bcl2和ki67在各实验组间比较均差异显著（Plt;0.01）；IGF1、bcl2和ki67表达与组织学分级密切相关（r=0.997、r=0.999和r=0.988，Plt;0.01）；IGF1与bcl2、ki67表达密切相关（r=0.995和r=0.995，Plt;0.01）。结论 IGF1和bcl2在星形胶质细胞瘤的发生、发展中起重要作用；IGF1、bcl2和ki67联合应用在星形胶质细胞反应性增生与低级别星形胶质细胞瘤的鉴别诊断中可能会有一定的意义。 【关键词】 组织芯片；星形胶质细胞反应性增生；星形胶质细胞瘤；IGF1；bcl2 Key words：Tissue chip; Reactive astrocytes proliferation; Astrocytomas; IGF1; bcl2 目前关于星形胶质细胞反应性增生与低级别星形胶质细胞瘤的相关性研究，国内外都较少见。胰岛素样生长因子1（insulinlike growth factor 1,IGF1）是一种自分泌或旁分泌的癌基因，具有刺激DNA合成和转录的能力。bcl2是目前研究较为深入的凋亡抑制基因。ki67是目前已知的增殖抗原中最具增殖能力的代表指标。本研究旨在探讨IGF1、bcl2和ki67在星形胶质细胞反应性增生与低级别星形胶质细胞瘤中表达的区别，为深入研究两者的鉴别诊断奠定基础。 1 资料与方法 1.1 资料 收集哈尔滨医科大学第一临床医学院病理科2001～2004年库存脑星形胶质细胞反应性增生及星形胶质细胞瘤石蜡标本148例，其中男101例，女47例，年龄8～73岁，平均年龄39.4岁。反应性增生组49例均选自临床诊断为肿瘤但病理确诊为星形胶质细胞反应性增生的病例；肿瘤组按WHO中枢神经系统肿瘤分型（2000），在光镜下区分为低级别星形胶质细胞瘤组（Ⅰ～Ⅱ级）49例，高级别星形胶质细胞瘤组（Ⅲ～Ⅳ级）50例；对照组12例正常脑组织取自非脑部疾病引起死亡的成人尸检脑标本。 1.2 组织芯片的制备 采用组织芯片制作机细针打孔的方法制作芯片，打孔针直径为2mm。 1.3 免疫组化染色 1.3.1 试剂 一抗为兔抗人IGF1多克隆抗体（BA0939）浓度为1∶100，SABC试剂盒购自博士德生物技术有限公司。鼠抗人bcl2（bcl2100）单克隆抗体(即用型)；鼠抗人ki67(K2)单克隆抗体(即用型)均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 1.3.2 方法 应用SABC法和PV6000通用型二步法进行免疫组化染色。 1.3.3 结果判定 IGF1、 bcl2阳性细胞以细胞浆出现棕黄色颗粒为标准，Ki67以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，根据阳性细胞所占百分比和染色强度分为：无明显阳性细胞为（-）；阳性细胞数lt;25%，着浅色棕色为（+）；阳性细胞数≥25%，着棕色或深棕色为（++）。 1.4 统计学分析 利用SPSS11.0软件进行统计学分析，用Pearson χ2检验及直线相关性分析，认为Plt;0.05有统计学意义。 2 结果 2.1 IGF1、bcl2和ki67蛋白在各实验组中的表达 在切片及免疫组织化学染色过程中，正常组芯片中无组织缺失；反应性增生组49例中4片组织缺失，有效样本45例；低级别肿瘤组49例中IGF1和ki67两个指标均有2片组织缺失，有效样本47例，bcl2有7片组织缺失，有效样本42例；高级别肿瘤组50例中ki67有8片组织缺失，有效样本42例，IGF1有5片组织缺失，有效样本45例，bcl2有2片组织缺失，有效样本48例。免疫组化结果，见表1、图1～4。 2.2 IGF1、bcl2和ki67蛋白在各实验组中的统计学检验 （１） IGF1、bcl2和ki67在各组间差异均