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时间分辨荧光免疫分析技术在HBVM检测中应用 　【关键词】 时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)；乙肝病毒标志物(HBV 　　［摘要］ 目的：比较TRFIA与ELISA两种方法对HBVM检测的结果，并对其进行分析，了解TRFIA法测定HBVM的准确性及可行性。方法：对102例就诊患者的血清标本同时采用TRFIA和ELISA两种方法检测乙肝标志物。结果：两种检测方法对HBVM的结果比较差异无显著性(Pgt;0．05)。但就乙肝患者检测的医学模式来讲，以TRFIA法的结果为标准，与ELISA法比较有所差别，其中HBsAgHBcAb阳性模式者有显著差异(Plt;0．05)，其他医学模式均无差异。结论：TRFIA对HBVM的检出率高于ELISA，能够弥补ELISA法因灵敏度相对较低所引起的假阴性，TRFIA作为一种高灵敏度的方法，可为临床诊断、疗效观察、及乙肝疫苗的接种提供依据。 　　［关键词］ 时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)；乙肝病毒标志物(HBVM)；高灵敏度 　　我国是乙型肝炎高感染的国家，有资料显示，全国人口中有10％以上为乙肝携带者，感染率非常高，而低浓度在人群中的分布率为0．53％［1］。而常规的ELISA检测方法容易造成漏诊［2］，在临床上有一定局限性。随着免疫技术的不断发展与提高，使抗原抗体检测灵敏度有了明显提高，而TRFIA作为一种高灵敏、准确、快速的方法可以较大的改善这一缺陷，本文用这两种方法检测HBVM，旨在探讨二者之间的关系及临床应用。 　　1　材料与方法 　　1.1　研究对象　　 　　采用我院门诊及住院患者102例，其中男61例，女41例，年龄9岁～51岁，平均(28．4±17．7)岁。 　　1.2　仪器和试剂　　 　　TRFIA法使用上海新波生物技术有限公司生产的Anytest-2000型时间分辨荧光免疫分析系统及配套试剂。ELISA法使用奥地利BIOELLHTⅡ型自动酶标仪，试剂由兰州标佳生物技术有限公司提供。 　　1.3　检测方法　　 　　102例血清标本同时使用TRFIA及ELISA两种方法检测。 　　1.4　统计处理　　 　　测定结果用配对资料χ2检验统计。 　　2　结果 　　2.1　对102份血清标本同时使用TRFIA和ELISA两种不同方法测定，对产生的各种乙肝医学模式进行比较(见表1)。检测时，将抗原抗体排序：以HBsAg为1，HBsAb为2，HBeAg为3，HBeAb为4，HBcAb为5。其中1、5阳性模式检出率分别为3．92％，10．78％，差异有显著性(Plt;0．05)，其他医学模式差异均无显著性(Pgt;0．05)。表1　两种检测方法对102份标本检测结果的比较医学模式类型　（略）注：*表示两种方法经配对资料卡方检验比较：Plt;0．05。 　　　2.2　对HBVM中的各项目用这两种方法检测的结果进行对照，(见表2)。TRFIA法的检测阳性率均略高于ELISA法，但都差异无显著性(Pgt;0．05)，对HBsAg、HBsAb、HBcAb的检出符合率为100％。HBeAg、HBeAb用ELISA法检出率相对较低，漏检率为7.84％(8/102)。表2　两种方法对HBVM的检测结果对照检测项目（略）　　　　 　　3讨论 　　HBVM的变化是评估乙型肝炎感染后病情转归的重要依据，也是抗病毒治疗的疗效考察指标之一，目前国内检测HBVM使用较多的仍是ELISA法，主要有以下缺点：无法定量；灵敏度低；由检测原理带来的前带现象无法解决；易传染，无法完成HBV感染的动态观察以及低水平HBV感染指标检测。本研究显示，TRFIA法对HBVM的检出率与ELISA法虽差异有显著性(Pgt;0．05)，但TRFIA法还是高于ELISA法，以TRFIA为标准，ELISA法对HBVM的检出符合率分别为100.00％、100.00％、73．33％、88．24％、100.00％，由此可见，对于TRFIA法而言，ELISA法漏检的指标主要集中在HBeAg和HBeAb这两个项目上，总漏检率为7．84％。究其原因，主要是因为TRFIA的灵敏度较高，使其能检测到低浓度的抗原和抗体，初步解决了隐源性肝炎中HBV标志物检测的问题。TRFIA法是近年来发展的无污染、高灵敏度的免疫标记检测技术。因稀土离子本身激发光谱宽而产生荧光发射光谱窄，从而保证了该技术的高精密度，以稀土离子为标记物，通过时间延迟技术，去除了非特异性荧光干扰，明显提高了检测灵敏度，并通过激发光与发射光之间较大的STOKES位移，提高了光谱的分辨率，使特异性明显增强，又采用了独特的荧光解离增强技术，可使有效荧光的效率增强约100万倍，从而使灵敏度增高，并具有定量检测功能［3］。有文献［4］报道，TRFIA对HBsAg的最小检测浓度可达到0．05 ng/ml