第四章-第五讲-结晶、浓缩、干燥、成型和检测指标.pdf

第七节酶液的结晶、浓缩、干燥与成型 第八节酶液的结晶、浓缩、干燥与成型 一、结晶 1、结晶的一般原理 结晶是指控制适当的条件，使溶液中的溶质以 晶体形态从溶液中析出的工艺过程。 （无排列排 不饱和 饱和 过饱和 析出沉淀 （快） 队机会） 溶液 溶液 溶液 析出结晶 （慢） 2、结晶“三步曲” 稍微越过饱和状态，处于介稳态，浓 第一步：形成过饱 缩、降温、调节pH至pI，可使溶液 和溶液 趋于过饱和。 过饱和溶液在一定条件下可形成极微 第二步：形成晶核 小的有序排列的固相物，成为后续晶 体生长的核心，称为晶核。 第三步：晶体生长 溶质在晶核周边不断有序排列，晶体 逐步长大。 3、结晶条件 （1）酶的纯度——一般酶纯度应达到50% 以上。 （2 ）酶蛋白的浓度——对大多数酶来说，蛋白质浓 度在3~50mg/mL 较好。 （3 ）晶种——有些不易结晶的酶，需加入微量的晶 种才能形成结晶。 （4 ）温度—— 一般控制在0~4℃范围内。 （5 ）pH值——一般选择在被结晶酶的pI值附近。 4、酶结晶的方法 （1）盐析法 （1）平衡透析法 （2）有机溶剂结晶法 （2 ）气相扩散法 （3）pH值或温度诱导法 （1）盐析结晶法 饱和(NH ) SO 溶液 4 2 4 低温静置 浑浊状态 （2 ）有机溶剂结晶法 有机溶剂 冰箱中静 置1-2h 离心除沉淀 冰浴 浑浊状态 低温静置 （3 ）pH诱导结晶法、温度诱导结晶法 酸或碱 ①等电点结晶法 ②温度诱导结晶法 （4 ）平衡透析法 盐析结晶法、有机溶剂结晶法、等电点结晶法 派生 平衡透析法 透析袋 酶液 盐溶液（或有机溶剂或接近酶pI