沉默人胃癌SUV39h1基因对RASSF1A基因表达影响.pdfVIP

．t_‘．—J一 月Ij 吾 胃癌的发生发展是多因素、多阶段、多基因作用的结果，但确切的分子机制尚未完 全阐明。目前认为胃癌不仅是遗传疾病，同时也是由基因沉默所引起的表观遗传学疾病。 表观遗传涉及的主要机制为：DNA甲基化、组蛋白的修饰和染色质的重塑。组蛋白 的修饰包括乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化、糖基化、ADP糖基化等，他们是组蛋 白密码的基本元素。组蛋白是染色质的核心，其尾部的共价修饰在基因的表达调控中起 重要的作用。在组蛋白尾部众多的赖氨酸残基甲基化中，H3．K9甲基化是基因转录沉默 通过研究敲除 的标志。SUV39hl是组蛋白赖氨酸H3一K9的特异性甲基化转移酶， 则直接负责H3．K9的三甲基化。进一步的研究表明H3．K9的单双甲基化存在于常染色 质，而H3．K9的三甲基化形式主要在异染色质的不同类型上发现：如兼性异染色质、 基因沉默中有着非常重要的作用(21。 肿瘤在发生发展中有多种癌基因及抑癌基因的参与。目前已研究出许多的抑癌基因 恶性肿瘤的候选抑癌基因乃1参与多种肿瘤的如肺癌、乳腺癌和消化道肿瘤、泌尿道肿 瘤的发生发展。近年来RASSFlA基因表观遗传修饰的异常与肿瘤关系的研究已经取得 重大的进展。目前的研究表明RASSFlA基因启动子的超甲基化是其失表达的重要途径， 在肿瘤的发生发展中可能起着重要的作用。RASSFlA基因的失表达与胃癌的关系的研 究主要集中在起动子DNA的甲基化“1以及组蛋白去乙酰化方面，而与组蛋白的甲基化 方面的研究不多。 近年来，随着人类基因组计划的完成，基因治疗日益受到科研工作者的关注，它为 intierefemce， 多种疾病的机制研究和临床诊治提供了新的策略和途径。RNA干涉(aNA RNAi)现象首先在秀丽线虫属发现，它是生物体对病原性双链RNA一种保守的生物学 反应151。目前作为一种实验方法RNAi已被广泛应用于基因功能的研究，并已尝试应用 intiereferingRNA，siRNA)触发RNA诱导沉默复合体(IⅢAinducesilencingcomplex，ⅪSC) 的形成，ILlSC进一步裂解同源基因转录本mRNA，从而达到抑制特异性基因表达的目 中RASSFlA基因的表达调控机理，为胃癌的靶向治疗提供理论依据。 4 主要实验材料及仪器设备 一、 肿瘤细胞 Centerfor 人胃癌细胞系SGC-7901、Hela细胞购于中国典型培养物中心(ChinaType CultureCollection，CCTCC)。 二、主要试剂 RPMI一1640干粉培养基 (1)RPMI-1640干粉培养基：美国Gibco公司生产。每lO．Og 溶于1L三蒸水，调节pH值为7．2—7．4之间，正压过滤除菌分装，4℃保存备用； 存备用； (4)PBS液：NaCl 89、KCl0．29、Na2HP04·12H203．49、KH2P040．29(均为国产分 析纯)，溶于1000ml三蒸水，分装，高压灭菌，4℃保存备用； 菌分装，4℃保存备用； (6)二甲基亚砜(DMSO)：美国Sigma公司生产； (7)Trizol试剂盒：上海生工生物工程技术服务有限公司生产； (8)DEPC：美国BBI公司生产； (9)Reverse TranscriptionSystem：上海生工生物工程技术服务有限公司生产； (10)RASSFlA基因上、下游引物序列：上海生工生物工程技术服务有限公司合成； (11)0-actin上、下游引物序列：上海生工生物工程技术服务有限公司合成； PCR MasterMix：上海生工生物工程技术服务有限公司生产； (12)2×Taq