不同剂量β－葡聚糖对花鲈免疫和抗氧化指标的影响.docVIP

　　不同剂量β－葡聚糖对花鲈免疫和抗氧化指标的影响 　　花鲈(Lateolabrax japonicus)属鲈形目, 科,花鲈属,是近年来兴起的名优水产养殖品种,因其肉质细嫩,营养丰富,深受消费者喜爱。近年来我国花鲈养殖规模不断扩大,在集约化、规模化、养殖环境恶化等条件下常有病害发生,严重制约花鲈养殖业的发展。 　　在应用化学药物对水生动物疾病进行防控的过程中,常带来耐药性、药物残留及水体污染等问题。近年来,免疫增强剂的开发和应用为水生动物疾病防控提供了一个新的方向[1]。 　　beta;-葡聚糖是一种增强免疫活性的多糖,广泛存在于各种植物和真菌中,具有抗氧化、改善血脂和肠道功能的作用[2-7]。 　　研究表明,饲料中添加beta;-葡聚糖能显着提高鱼虾免疫力,从而提高其抗病力[8-9]。本实验室前期研究结果表明,在饲料中添加适量beta;-葡聚糖能够促进花鲈的生长性能,但关于beta;-葡聚糖对花鲈免疫能力和抗氧化功能的影响尚未见报道。因此,笔者进一步研究了饲料中添加不同剂量beta;-葡聚糖对花鲈免疫和抗氧化指标的影响,以便为beta;-葡聚糖在花鲈养殖上的应用提供更丰富的理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验饲料 　　以鱼粉、大豆浓缩蛋白为蛋白源,鱼油、豆油为脂肪源,高筋面粉为糖源,配制半纯化基础饲料(对照饲料),其基础饲料配方及营养成分组成见表1。 　　在基础 饲 料 中 分 别 添 加200、400、600、800、1000mg/kgbeta;-葡聚糖(啤酒酵母提取物,纯度gt;90.0%)配制5种试验饲料。原料经粉碎过40目筛,按配方准确称取逐级混匀后,用SLX-80型双螺杆挤压机制成2.0mm的颗粒饲料,55 ℃下烘干,自然冷却后放入密封袋中,置于冰箱中-20℃保存备用。【1】 　　 　　1.2 试验鱼及饲养管理 　　试验用花鲈购自福建诏安县英港育苗场。试验鱼先在水泥池中投喂商品饲料暂养至约8g。养殖试验在广东省农科院动物科学研究所水产实验室室内循环养殖系统的养殖桶(体积约300L)内进行。选取体质量为(8.35plusmn;0.17)g的花鲈,随机分成6组,每组4个重复,每个重复30尾鱼。试验开始前用基础饲料驯养1周,待其稳定后,分别饲喂对照饲料和5种试验饲料。日投喂2次(8:30和18:00),日投喂量(以干物质计算)为体质量的4%~6%,试验周期6周。养殖期间,24h供氧,溶氧量gt;7mg/L,水温为28~30.9 ℃,盐度1,pH 7.5~8.0,氨氮lt;0.1mg/L。每周换水2次,每次换水量为总水量的1/3。 　　42d的饲养试验结束后,在原分组的基础上,从每个重复随机取14尾健康花鲈,采用氯化铵进行应激试验,每组4个重复。向水体(体积约300L)中加入氯化铵母液,使非离子氨质量浓度达到3.29mg/L,同时调节水体pH为7.76,应激期间水体pH值用水质监测仪测定。观察花鲈的发病和死亡情况,统计死亡尾数,计算96h内的累计死亡率和相对保护率。非离子氨按下式计算:NH3=[NH4++NH3]/[10(pKa-pH)+1]式中,pKa=0.09018+2729.92/T(T为开氏温度,T=273+t℃) 　　 　　1.3 样品采集和指标分析 　　养殖试验结束,禁食24h后取样。每个重复随机取8尾鱼,用1mL注射器自尾静脉取血,血液采集后4℃静置4h,于4℃条件下3500r/min离心10min,取上清液分装,将血清置于冰箱中-80 ℃保存备用。 　　1.3.1免疫指标测定免疫球蛋白M和补体3含量采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法测定;碱性磷酸酶活性采用磷酸苯二钠比色法测定;酸性磷酸酶活性采用分光光度法 测 定;一 氧 化 氮 含 量 采 用 硝 酸 还 原 酶 法测定。 　　1.3.2抗氧化指标测定总抗氧化能力采用比色法测定;超氧化物歧化酶活性采用羟胺法测定;过氧化氢酶活性采用可见分光光度法测定;丙二醛含量采用TBA法测定。 　　试剂盒均购自南京建成生物工程研究所,具体测定方法参照试剂盒所附说明书进行。 　　1.4 数据统计 　　采用SPSS 17.0版软件进行数据统计和分析,试验数据用平均值plusmn;标准差表示,显着性水平用Plt;0.05表示,先对数据作单因子方差分析,若处理间有显着差异,再作Duncanprime;s多重比较。 　　2 结果与分析 　　2.1 饲料中添加beta;-葡聚糖对花鲈免疫指标的影响 　　饲料中添加beta;-葡聚糖对花鲈免疫指标的影响见表2。由表2可见,随着饲料中beta;-葡聚糖添加量的增加,各免疫指标呈先升后降的趋势,均在400mg/kg组达到最大值。 　　400mg/kg组和600mg/kg组免疫球 蛋 白M含 量 显 着 高 于 其 他 各 组