人视网膜母细胞瘤蛋白真核表达载体的构建及其在前列腺癌细胞中的表达与定位.pdfVIP

·422· Med 南方医科大学学报USouthUniv) 2010；30(3) 人视网膜母细胞瘤蛋白真核表达载体的构建及其在前列腺癌细胞中的表 达与定位 陆斌1，宋先璐2宋方丽3，赵善超1，姜勇3(南方医科大学南方医院1泌尿外科3病理生理学教研室，广东广 州510515；2广州医学院附属肿瘤医院，广东广州510095) 摘要：目的构建人视网膜母细胞瘤(retinoblastomal，RB—1)基因真核表达载体，并在前列腺癌细胞株PC．3中表达．为 进一步研究其在前列腺癌发病中的作用和机制打下基础。方法采用PCR方法扩增RB．1基因编码区的全长序列．并加 上FLAG标签，利用分子克隆技术将其重组于CMV载体中。利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性。转染PC．3细胞．用 检测到RB．1有表达。免疫荧光检测其主要定位于细胞核内。结论成功地构建了RB．1真核表达载体，其能够在PC．3 中高效表达，并主要定位于细胞核内。 关键词：人视网膜母细胞瘤蛋白；真核表达载体；定位；前列腺肿瘤 中图分类号：R737．25文献标识码：A 文章编号：1673-4254(2010)03．0422-04 Construction， andlocationof vector in expression eukaryoticexpression human cancerPC一3cells prostate LU Xian—Iu2SONG Binl，SONG Fang-li3，ZHAOShan-cha01，JIANGYon93 Medical DepartmentofUrinarySurgery，NanfangHospital。，3DeparlmentofPathophysiology,Southem Medical ZDepartmentofRadiotherapy,CancerHospitalofGuangzhouCollege，Guangzhou，510095 Toconstructall recombinantvectorforretinoblastomal and Abstract：Objectiveeukaryotic expression gene(R8-n The theroleofRB—lin cancer．Methods ofRB—l withFLAGwas investigate prostate codingsequencegenetagged amplified fromthe CMV．1氇bvPCRmethod．ThewasclonedintoCMV vectorandidentified plasmid fragment expression by restriction and Westem WasusedtodetectRB．1 and enzyme digestionsequenceanalysis． Blotting expression used RB—l in immunofluorescenceWas toobservedistributionPC．3cellstransfectcdwiththerecombinant．ResultsThe vectorCMV．FLAG．RBWas constructedasconfirmedbv endonucl