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口蹄疫病毒3D基因真核表达载体pEGFP-3D的构建及其融合蛋白分子在BHK细胞中的定位.pdf
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华北农学报·2008，23(4)：5*9
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构建及其融合蛋白分子在BHK细胞中的定位
毕研丽，沈小燕，丛国正，刘湘涛，常惠芸，才学鹏
(中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，农业部畜禽病
毒学重点开放实验室，国家口蹄疫参考实验室，甘肃兰州730046)
摘要：为研究口蹄疫病毒RNA聚合酶3D基因的分子生物学特性及定位。构建了3D基因真核表达载体pEGm
3D，观察了3D在BHK．2l细胞中的瞬时表达情况。从重组质粒pMDl8．T．3D扩增到3D基因，与pGEM．Te鹪y载体连
组化检测转染细胞中3D基因表达情况和3D基因在细胞中的定位，westem
blol“ng验证pEGm3D融合基因的表达。
结果表明，成功构建了重组表达质粒pEG限3D，并在BHK一2l细胞中进行了表达。免疫组化分析表明，3D蛋白主要定
位于细胞核；westem kDa处出现阳性条带，说明表达的外源蛋白具有免疫活性。
blottjng证实pEGm3D融合蛋白在80
pEGm3D表达载体转染细胞后很快就能通过观察荧光蛋白而检测出基因的瞬时表达情况，为基闲转染研究中确定转
染效率、3D的表达情况及蛋白定位等提供了直观的靶标，有望应用于FMDv聚合酶分子的生物学特性研究。
关键词：口蹄疫病毒；pEGm3D表达载体；定位；免疫活性
中图分类号：s432．4+文献标识码：A 文章编号：1000一7091(2008)04—0005一05
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Expression Molecule
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