单羧酸转运蛋白在肿瘤细胞和线粒体DNA毒性小鼠脑内地表达.pdf

摘要 最后通过对线粒体DNA毒性小鼠海马和小脑代谢相关蛋r1变化的检测，更 加深入的了解了mutUNGl表达引起的线粒体功能障碍对突触信息传递功能、葡 萄糖转运及乳酸能量代谢所造成的影响。更是首次详细捕绘了MCTl和MCT2 在小鼠海马CAl区stratumradiatum区域和小脑分子层和颗粒层的分布差异及表 达量的不同。为进一步了解正常及病理状态下，大脑能量代谢，尤其是葡萄糖 代谢_；fn-?L酸代谢的规律，提供了形态学的依据。 第一部分：单羧酸转运蛋白在低氧培养脑和乳腺肿瘤细胞膜表面的密 度变化 目的： 分析不同氧环境下人体乳腺癌和脑胶质细胞瘤细胞膜表面的单羧酸转运蛋 白密度变化，为搦示其乳酸代谢特点提供理论依据。 方法： 1．人乳腺癌T-47D和脑胶质细胞瘤细胞T98G分别在4％循环低氧和20％常氧 状态下培养。 2．在培养过程中，监测培养液中pH、乳酸和葡萄糖浓度的变化。 3．采用Western blotting方法检测所用5种一抗的特异性。 4．采用后包埋免疫金颗粒标记透射电镜技术对肿瘤绌胞膜表面不同MCTs进行 标记。 J软件对电镜照 5．使用透射电镜对肿瘤细胞膜表面区域观察拍照，通过Image 片膜表面区域进行分析，得出不l一氧环境对肿瘤细胞膜表面MCTs表达密度 的影响。 结果： 1．肿瘤细胞在循环低氧环境下培养，其能量代谢方式和常氧状态下培养的肿瘤 绌胞之间发生了变化，表现为培养液中pH值，乳酸和葡萄糖的浓度变化趋 势彳i同。 HI 摘要 Western blotting检测，具有良好特异性。 3．电镜图片统计结果显示，MCTI和MCT4在低氧培养的两种肿瘤细胞膜表而 都表现出了表达上调。MCT2在低氧培养的乳腺癌T-47D细胞膜表面的密度 增加了，而在同样是低氧环境下培养的胶质细胞瘤T98G细胞膜表面的密度 却降低了。 结论： 1．循环低氧状态可以引起肿瘤细胞代谢模式的转变。 2．不同单羧酸转运蛋白的协同作用，对肿瘤细胞适应不同氧环境发挥重要功 能。也为阻断相应蛋白，抑制肿瘤细胞的生长和代谢，提供了新的思路。 第二部分：线粒体DNA毒性对线粒体动能活性的影响 目的： 体DNA毒性对线粒体动能活性的影响。 方法： 1．制作mutUNGl-expressing转基Nd,鼠。 2．定量PCR检测小鼠海马线粒体总DNA拷贝数及线粒体DNA的表达量。 关蛋白的改变。 结果： 1．mutUNGl一expressing小鼠海马内线粒体动能活性的缺失。 2．mutUNGl一expressing小鼠中mtDNA数量和转录水平显著降低。 3．线粒体DNA编码障碍影响了电子传递链的效能。 4．mutUNGl的表达导致海马内星形胶质细胞的增生。 5．海j与内的抗氧化防御系统在mutUNGl一expressing小鼠内受到影响。 6．海马的氧化应激引起的DNA损伤和APEl的重新分布。 摘要 结论： 分析，揭示了广泛存石!的神经退行性变疾病，如Alzheimer’S病的病理学特征。 了解这些病理特征的细胞内机制对丁提}{：正确的治疗方法有重要意义，并且 线粒体功能的缺失似乎在疾病的发展过程中起到了至关重要的作用。 第三部分：线粒体DNA毒性小鼠脑内能量代谢相关蛋白的变化 目的： 通过对线粒体DNA毒性小鼠海马和小脑能量代谢相关蛋白分布和调整的形 态学研究，了解神经退行性变疾病脑内能量代谢变化的规律。 方法： ‘ 1．mutUNGl一expressing转基因小鼠的制作。 取脑，并进行透射电镜的组织准备。 MCT2)免疫金颗粒的标记。 4．电镜图片的拍摄及相关抗体存相应区域