单轴拉伸装置中硅胶膜地应力分析与静态拉伸对ECV-304细胞形态地影响.pdfVIP

4.3.1 细胞的培养 35 4.3.2 硅胶膜的处理 35 4.3.3 细胞的接种加载 36 4.3.4 显微形态学观察 36 4.3.5 细胞形状变化几何参数分析 36 4.3.6 细胞骨架的 FITC—鬼笔环肽染色原理及方法 36 4.4 实验结果 37 4.4.1 细胞的形变结果 37 4.4.2 细胞内应力纤维的变化情况 39 4.5 讨论 40 4.6 本章小结 41 5 结论及展望 42 5.1 本文的主要工作和结论 42 5.2 后续工作的展望 42 致 谢 43 参考文献 44 附 录 50 V 1 绪论 生物体，无论动物、植物还是微生物，时刻处于各种机械力的作用下。在外 部，生物体受到重力、空气压力、液体压力、声波刺激等力的作用；在内部，则 存在肢体运动和细胞生长产生的局部应力，心脏和肺等器官收缩运动产生的压力， 体液流动产生的剪切力、压力和周向力等；在受力的对象上，无论器官、组织、 细胞还是生物大分子都受到机械力的作用。这些力影响并调节生物体生长、发育、 生理功能，乃至基因的表达和调控[1-4] 。研究力对生物体的作用，无论在理论上还 是应用上都有相当的意义。在理论上力信号的转导及其机制是一个不同于传统生 化信号转导的领域，目前关于力信号转导的机制问题尚未完全弄清。在应用上， 研究力对生物体的作用对于研究心脑血管疾病（如动脉粥样硬化、血栓等）的成 因和临床上的预防及治疗，有很好的指导作用。此外运动生物力学、太空育种等 领域也和力对生物体的作用密切相关。 1.1 细胞力学加载方式的研究现状 研究力对细胞的作用，是研究力对生物体作用的最重要部分。因为细胞构成 组织和器官，同时自身又由生物大分子构成，因此力对细胞的作用是力对组织和 器官作用的基础，同时也是进一步研究力对生物大分子作用的起点。在这样的背 景下就发展出细胞力学这样一个新兴学科，细胞力学作为组织工程学重要的组成 部分发展非常迅速，它涉及到细胞在载荷作用下细胞、细胞膜、细胞骨架的变形、 弹性常数、粘弹性、粘附力等力学性能的研究，以及力学因素对细胞粘附、铺展 [5] 及生长、分化等生物学行为的影响 。由于人体细胞的尺度在十几至几十微米之间， 而细胞膜的厚度只有几到几十纳米[6] 。因此，常规的宏观力学加载方法和实验技术 无法直接使用。对于细胞力学来讲，研究的关键取决于细胞的加载和实验技术。 所以寻找合适的细胞加载方法和细胞变形的相关生物学手段是细胞力学面临的首 要问题。细胞力学采用的实验技术可大致分为四种类型：第一类是采用显微技术 和微管吮吸方法直接对单个细胞进行加载，并通过实时记录系统加以记录，利用 计算机图象处理技术进行位移测量和变形数值分析，它的典型代表是微管吮吸实 验技术。第二类是采用其他介质，利用流变学原理间接的对细胞进行加载，如流 动腔、悬浮技术和微孔滤筛法等，主要是通过流体流动产生的剪切力或者压力对 细胞加载。第三类通过使用液体或气体作为传导介质进行加载。第四类是对细胞 粘附的材料进行加载，通过基底材料的变形使应变传递到细胞上。第五类是将磁 化的微珠结合某种多肽 （如RBD 多肽）再与细胞内的某种蛋白质进行特异性结合， 1 然后将细胞放入另一个方向与磁珠原磁场方向垂直的磁场中，通过磁场的强度计 算出力的大小和方向。该方法的主要优点是可以测量细胞受体分子水平的力学性 质，是定量测量细胞刚度的有效办法之一。 1.1.1 微管吮吸法 微管吮吸技术是由微吸管、显微操作器、倒置显微镜、负压加载系统、实时 记录系统、图象处理仪和计算机组成。微管是用外径为几毫米的空心玻璃管在专 用的微管拉制器上拉成尖端内径为几微米的微吸管，加载时利用显微操作器与细 胞表面轻轻接触，开启负压加载系统使细胞在阶跃负压作用下，在微吸管内产