硫醇类荧光探针研究进展.docVIP

课程论文 (科研训练、毕业设计) 题 目：硫醇类荧光探针研究进展 姓 名：xxxxx 学 院：化学化工学院 系：化学 专 业：化学 年 级：大一 学 号：xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 硫醇类荧光探针研究进展 摘要:硫醇是生物体中许多蛋白质和小分子的重要组成部分，在细胞的抗氧化系统中具有重要的作用，定量检测硫醇在生物化学和临床化学中具有重要的意义。荧光法由于其具有灵敏度高、能够实现对活体甚至单个细胞的实时可视化示踪的优点，成为目前广泛采用检测细胞内硫醇类物质的一种重要手段。本文引用文献 51篇，按荧光探针与巯基作用机理的不同分类，就近年来该领域的研究进展做了比较系统的评述，并展望了此类探针的发展趋势和应用前景。 关键词:硫醇，荧光探针，综述 1 引言 硫醇是生物体中许多蛋白质和小分子的重要组成部分，在细胞的抗氧化系统中具有重要的作用。小分子硫醇包括半胱氨酸(Cys)、谷胱甘肽(GSH)、硫辛酸和辅酶A；大分子硫醇包括含巯基的多肽、酶和生物膜。大量的生物现象被认为依赖于这些包含巯基的硫醇类物质，如氧化还原反应、甲基转移反应、二氧化碳固定反应以及辅酶A参与的反应等。谷胱甘肽(GSH)是细胞内含量最高的小分子硫醇(1—10 mmol／L)，它存在氧化型谷胱甘肽(GSSG)和还原型GSH的氧化还原动态平衡。大量资料显示，谷胱甘肽在维持细胞的氧化还原动态平衡、氧化应激和在细胞的生长、功能中起着重要作用，而且谷胱甘肽的水平还与许多疾病和癌症有着直接的联系。因此，定量检测生物体系中硫醇的浓度在生物化学和临床化学中具有重要意义。目前已报道的用于检测硫醇的方法主要有：高效液相色谱法、电化学法、荧光法等。荧光法由于其探针特殊的光物理和光化学特性而具有灵敏度高、动态响应范围宽的特点，更重要的是能够实现对活体甚至单个细胞的实时可视化示踪，成为目前广泛采用的检测细胞内硫醇类物质的一种重要手段。本文按荧光探针与巯基作用机理的不同分类，就近年来该领域的研究进展做了比较系统的评述，并展望了此类探针的发展趋势和应用前景。 2 正文：利用巯基的亲核性检测硫醇的荧光探针 1．利用巯基对缺电子双键的亲核加成反应检测硫醇 利用巯基对缺电子双键的亲核加成反应检测硫醇的探针主要为氮取代的马来酰亚胺类衍生物。马来酰亚胺通常易与硫醇类化合物发生亲核加成反应，在室温下pH 5～8时几分钟即可完成。Kanaoka等发现氮取代的马来酰亚胺类的大多数化合物自身没有荧光或荧光很弱，当它与包含巯基的化合物反应后形成具有强荧光的加成产物，并于1970年开发了第一个比较实用的马来酰亚胺类荧光试剂1。试剂1是一个非常灵敏的检测巯基类化合物的荧光试剂，缺点是激发和发射均处于紫外区，且水溶性差。经过对荧光发射团系统的研究后，Machida等又进一步开发了波长较长水溶性较好的试剂2。试剂2的激发和发射波长分别为400和480 nm，该探针在设计时为了增加水溶性引入了极性的香豆素荧光团和二甲氨基基团。试剂1和2被称为Kanaoka试剂，通常被用作荧光探针来共价标记蛋白质中的巯基活性点。近年来，许多氮取代的马来酰亚胺类硫醇荧光探针被开发，用来检测动物血清、肝脏、尿液等生物样品中的GSH、Cys等具有重要生物学意义的小分子硫醇。 1995年Langmuir等设计合成了5个以苯并香豆素(naphthopyranone)为母体荧光团的氮取代的马来酰亚胺类硫醇荧光探针4—8，这些探针与一些小分子硫醇如GSH、Cys等在生理pH条件下立即反应，脂肪族胺、氨基酸和非硫醇蛋白不干扰测定。他们将这5个探针与广泛使用的硫醇类荧光探针3比较，研究了其与硫醇反应前后荧光量子产率的变化，结果显示其与硫醇反应后荧光量子产率显著增大(其中试剂8荧光量子产率变化最大，0．012～0．66)，是比试剂3(0．021—0．13)更为灵敏的探针。 Liang等组设计合成探针5-maleimidyl-2-(in．methylphenyl)benzoxazole(MMPB)，与其它马来酰亚胺类探针相比，由于MMPB—GSH和MMPB—Cys荧光性质的不同，该探针可以实现对GSH和Cys的选择性响应。在激发和发射波长分别为299．2和355．8 nnl时，MMPB可以选择陛的检测GSH，在含有0．4倍的Cys的情况下对GSH的检出限可达3．23×10-10mol／L，其它氨基酸100倍存在时不干扰测定。该探针被成功用于人的血液、猪肝和猪心中GSH含量的测定；在激发和发射波长分别为305．6和425．6 nln时，MMPB还可选择性的检测Cys。在同时存在0．15倍的GSH的条件下对Cys的检出限可达6．2×10-10mol／L，其它氨基酸100倍存在时不干扰测定。该探针被成功用于蛋白质水解液、胱氨酸电解液