根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化体系的研究.PDFVIP

维普资讯 第 41卷第 3期 兰州大学学报 (自然科学版) 、b1．41NO．3 2005年 6月 JournalofLanzhouUniversity(NaturalSciences) June2005 文章编号：0455-2059(2005)03—0041—04 根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化体系的研究 郑秀芳 ，缪 为 ，李名扬。 (1．河西学院 生物系，甘肃 张掖 734000； 2．重庆市发展与改革委员会，重庆 400000； 3．西南农业大学 园艺系，重庆 北陪 400716) 摘 要：以重庆主栽品种的叶片和茎段为外植体，研究了不同转化条件(菌液浓度、感染时问、预培养 及共培养时间)对转化效率的影响，以及选择压和培养基对抗性愈伤出芽的影响，初步建立 了马铃薯品 种 “台湾红”和 “Spunt~’的遗传转化体系并获得了转化植株． 关键词：马铃薯；遗传转化；根癌农杆菌 中图分类号：Q943．2 文献标识码：A 马铃薯遗传转化系统 日趋成熟，但其遗传转 基上，于25。C下暗培养2—4d，再转入含500mg／L 化存在基因型限制、转化频率较低、重复性不强等 Cef(头孢霉素)和100mg／LKm的诱愈筛选培养基 问题，对地方性品种的研究也较少．我们 以重庆市 中．共培养和诱愈筛选的培养基均为MS+BA2．5 范围内普遍栽培的品种为受体建立 了有效的遗传 mg／L+NAA0．2mg／L，2周后将 出现的小颗粒愈伤 转化体系．在此基础上导人了抗真菌的抗菌肽基 继代于诱愈筛选培养基上，再经2周后转入芽分化 因，以求获得具真菌抗性 的转基因植株 ． 筛 选 培 养 基(MS+BA2mg／L+ZT1mg／L+GA35 mg／L+Cef500mg／L+Km100mg／L)上，小芽长 出 1 材料和方 法 后转入含Cef500mg／L和Km100mg／L的无激素 1．1 植物材料 MS培养基 中生根．在本实验 中，为建立有效 的遗 采用 了 “凉薯”、“凉薯97”、“Spunta”、“新米 传转化 系统，我们研究 了不同的转 化条件对转化 拉”和 “台湾红”5个 四倍体栽培种的试管苗为供试 效率 的影 响． 材料，由西南农业大学农学系和重庆市勉仁职业 1．4 转化体 的鉴定 中学提供． 抗 性愈伤 的PCR检 测 从经2代筛选所得抗 1．2 质粒及菌株 性愈伤 中随机抽取 10％ 的愈伤组织，按 照CTAB 质粒 pSupD4和菌株MP90均 由重庆大学周 国 法 2【】提取DNA．根据报道 的NPT1I基 因的序列 0【】 庆博士提供．该质粒 以pBI121为基础构建，构建 设计PCR引物进行扩增，并依据扩增结果来估测 时将pBI121的GUS基 因及其启动子切 下，重新 转化频率．其引物序列分别是：GAGGCTATTCGG 连接上 CaMV35S启动子和抗菌肽基因DSB，再将 CTATAGCTG和ATCGGGAGCGGCG CCGT 该质粒通过三亲杂交法导人农杆菌菌株MP90中． A，扩增产物 的序列长约670bp．PCR反应体 系： 1．3 转化方法 1XPCR缓冲液，0．2mmol／LdNTP，0．5#mol／L的2