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Lecture 5Sterilization（灭菌） 灭菌的概念 所谓灭菌，是指用物理或化学方法杀灭或物料或设备中一切有生命物质的过程 培养基灭菌、气体除菌、设备及管道灭菌 灭菌的方法 化学灭菌：常用的化学药剂有甲醛、氯（次氯酸钠）、高锰酸钾、环氧乙烷、季铵盐、臭氧 射线灭菌：利用紫外线、高能电磁波或放射性物质产生的?射线进行灭菌。 紫外线：穿透力低，仅用于表面消毒和空气消毒。 微波灭菌 射线灭菌 灭菌的方法 干热灭菌：常用的干热条件为在160℃下保温1小时，不如湿热灭菌有效，一些要求保持干燥的实验器具和材料等可以用干热灭菌。 湿热灭菌：利用饱和水蒸汽进行灭菌。蒸汽有很强的穿透力，且在冷凝时放出大量冷凝热，易使蛋白质凝固而杀灭各种微生物。培养基、发酵设备与管理的灭菌以及实验器材的灭菌，普遍采用湿热灭菌。121℃,20-30min 湿热灭菌比干热灭菌更有效 细菌蛋白质在有水的情况下易于凝固变性 湿热穿透力强 湿热蒸气有潜热存在，水蒸气凝固成水释放潜热，迅速提高被灭菌物体的温度 灭菌的方法 过滤除菌：利用过滤方法截留微生物，达到除菌的目的。适用于澄清流体的除菌：空气、热敏性培养基组分；产品提取也可利用无菌过滤处理料液，获得无菌产品。 过滤除菌 灭菌的方法 火焰灭菌法 物理方法：超高静压等 培养基的湿热灭菌 对数残留定律：对培养基进行湿热灭菌时，培养基中的微生物受热死亡的速率与残存的微生物数量成正比。 在一定温度下，微生物受热后，其死活细胞个数的变化如化学反应的浓度变化一样，其热死速率可以分子反应速率来表示，即微生物个数减少的速率与任一瞬间残存的菌数成正比。 -dN/dt=kN 培养基的湿热灭菌 t’=2.303/K t’-活菌数在受热过程中减少到原菌数的1/10时所需的时间 温度对k的影响遵循阿仑尼乌斯定律 k=Ae-ΔE/RT A为系数，s-1; ΔE为活化能，J/mol; R为气体常数，8.314J/(mol ?K)；T为绝对温度，K 培养基的湿热灭菌 对细菌芽孢来说，并不始终符合对数残留规律，通常必要的灭菌条件是110-130℃，5-20min，一般为121℃，20-30min。 培养基的湿热灭菌 培养基热灭菌时，不仅微生物会死亡，培养基的一些热敏性物质也会因受热而破坏：糖溶液会焦化变色、蛋白质变性、维生素失活、醛糖与氨基化合物反应等 -dc/dt=kdc c为对热敏性物质的浓度；kd为分解速率常数 培养基的湿热灭菌 分批灭菌 分批灭菌：将配制好的培养基放在发酵罐或其它窗口中，通入蒸汽将培养基和所用设备一起灭菌的操作过程，也称实罐灭菌。 优点：无需专门的灭菌设备，设备投资少，灭菌效果可靠，对蒸汽要求低（0.2－0.3MPa） 缺点：灭菌温度低、时间长而对培养基成分破坏大，操作难于实现自动控制。 连续灭菌 连续灭菌：以“高温、快速”为特征的连续灭菌，是将配制好的培养基在通入发酵罐时进行加热、保温、降温的灭菌过程，也称之为连消。 优点：对培养基破坏小，可以实现自动控制、提高发酵罐的设备利用率、蒸汽用量 缺点：蒸汽的要求较高，一般不小于0.45MPa，同时需要一组附加调和，设备投资大 空气的除菌 空气的除菌 发酵用无菌空气的质量标准： 100级是指每立方米空气中，尘埃粒子数最大允许值?0.5μm的为3500,的为0；微生物最大允许数为5个浮游菌/m3，1个沉降菌/m3 空气的过滤除菌 按过滤介质孔隙将空气过滤器分为两类 第一类为绝对过滤，介质孔隙小于被拦截的微生物大小，如用聚四氟乙烯或者纤维素枉费材料做成的微孔滤膜 空气的过滤除菌 第二类为深层过滤，介质孔隙大于被拦截的微生物大小但介质层有一定的厚度，机理是静电、扩散、惯性及拦截作用，如棉花过滤器、超细纤维纸、石棉滤板、金属烧结管 发酵废气废物的安全处理 排气经碱液处理后排向大气 若发酵染菌，则应经过灭菌处理后排放 * N：培养基中活微生物的个数；t：为微生物受热时间，s； k：为比死亡速率，s-1 温度对kd的影响也遵循阿仑尼乌斯定律 kd=Ae-ΔE/RT 由于微生物的ΔE比维生素高，因此一般都采用高温短时加热的方式，可以达到彻底灭菌和把营养分的破坏减少到最低限度的目的 压缩 冷却 减湿 过滤 自然界的空气 无菌空气 进入发酵罐的空气温度可比培养温度高10－30℃ 进入过滤器之前，空气的相对湿度??70 压缩空气的洁净度要达到100级 *