第五章生物化学检验实验室基本知识.docVIP

第二章 生物化学检验实验室基本知识 掌握好临床实验室的基本知识，包括实验用纯水，实验室常用器材、试剂、试剂盒，参考范围和医学决定水平，实验方法与参考物质，方法学评价试验，临床诊断性能评价等，才可能保证检测结果的准确度与精密度，能够促进实验室与临床的沟通，因此其对于从事生物化学检验的实验室工作者非常重要。 第一节 实验用纯水 实验用纯水指天然水和自来水经过蒸馏、离子交换、活性炭吸附、超滤等处理后除去了杂质的水。其质量的高低直接影响到检测结果的准确度和精密度。 一、实验室用水等级 1985年美国国家临床实验室标准委员会（national committee for clinical laboratory standards，NCCLS）将实验用水分为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级（表2-1）。中国国家技术监督局先后于1992年、2000年批准实施的《中国国家验室用水标准》（GB6682-92、GB6682-2000），也将分析实验用水分为三个等级（表2-2），两次的区别主要是电导率的计量单位不同。 表2-1 美国NCCLS等级纯水的规定及用途(1985) 级 别 Ⅰ级 Ⅱ级 Ⅲ级 pH 未定 未定 5.0～8.0 电阻率(MΩ·cm, 25℃,最大量) 10 2.0 1.0 硅(mg SiO2/L,最大量) 0.05 0.1 1.0 微生物含量（每毫升最大菌落数） 10 103 未定 硅（mgSiO2/L，最大量） 0.05 0.1 1.0 微粒 0.2μm微孔膜过滤 未定 未定 有机物质 活性碳过滤 未定 未定 用途 原子吸收，火焰光度，荧光，电解质，酶，高效层析，电泳，参比液，缓冲液。 一般实验室检验，器皿冲洗。 器皿洗涤，要求不高的定性试验。 　　 表2-2 中国国家验室用水GB6682-2002标准 名　称 一级 二级 三级 pH范围(25℃) 　　　－（未定） － 5.0～7.5 ?电导率（25℃）ms/m ?0.01 0.10 0.50 ?比电阻（25℃，MΩ·cm） 10 1 0.2 ?可氧化物质（以O计）mg/L??＜ 0.08 0.40 ?吸光度（254nm1cm光程） ?0.001 0.01 － ?蒸发残渣（105±25℃）mg/L － 1.0 2.0 ?可溶性硅（以SiO2计）mg/L??＜ ?0.01 ?0.02 　　　　可见，Ⅰ级（一级）水最好。临床实验室一般选用Ⅱ级（二级）水即可。水越纯，所含离子就越少，则电阻越大，导电性越差，即电阻率（比电阻）越大，电导率越小。同时，水越纯，所含的SiO2、细菌数、有机物等越少。 二、纯水的制备方法 （一）蒸馏法 自来水(或天然水)在蒸馏器中进行加热气化，水蒸气经冷凝后得到蒸馏水（distiled water，DW）。 蒸馏水的电阻率约为0.1MΩ·cm（25℃）.0MΩ·cm（25℃）.0MΩ·cm（25℃）·cm = 1MΩ·cm。 GB6682-2000规定的一级水电导率的最小值为0.01mS/m，即为0.01μS/mm = 0.1μS/cm，正好与GB6682-92规定的一级水电导率的最小值0.1μS/cm 相吻合。 2.可溶性硅限量试验 取纯水10ml，加入15滴1%的钼酸铵溶液，8滴草酸、硫酸混合液(按4%草酸1份加4mol/L硫酸3份的体积比)，混匀置室温10min，加5滴1%硫酸亚铁溶液，摇匀以不呈蓝色为合格(≤0.05mg/L)（以上百分比均为W/V）。 3.细菌菌落计数 按细菌常规菌落计数法进行检测。 实际工作中，除了要保证实验用纯水的制备质量外，还应重视纯水的贮存、运输以及使用过程的规范化，避免一切可能的污染，防止纯水等级的下降。 第二节 常用临床实验室器材 常用临床实验室器材包括普通的玻璃器材以及非玻璃器材。普通的玻璃器材又分为量器类和容器类。量器用于计量溶液体积，如量筒、容量瓶、刻度吸管等，不能作为反应容器，更不能加热。容器则是物质反应或贮存的器皿如试管、烧杯等。非玻璃器材包括微量加样器，一次性注射器、采血器、塑料试管，塑料吸管、试剂瓶、洗瓶等，以塑料类为主。 一、微量加样器的使用 微量加样器又称微量移液器、微量进样器。其下端为可装卸、可更换的尖管形移液嘴（吸头），上方是控制采样的推进按钮。常用的有固定式和可调式两种类型，规格有μl级、ml级。其准确度和精密度均高于有被替代趋势的刻度吸管。 （一）工作原理 微量加样器利用排代原理由活塞的定程运动形成负压吸入定量的液体，其吸液量由活塞在活塞套内移动的距离来确定，再按下按钮使活塞向下移动，排出活塞腔内的气体而将吸头内的液体排出。 （二）操作方法 1.选择在移液范围内的加样器，若为可调式则先将容量调节到所需的容量