浙科生物选修一自编学案(全部忠实教材原创).docVIP

玉环实验学校杭州校区2013届高三生物自编学案 教材：选修一生物技术实践　　　编制日期　　使用日期编写：陈大安　　　　　　　　　审核：　　　　　　　　　终审：　　　　　　 班级：　　　　　　　　　　　　学号：　　　　　　　　　姓名：　　　　　　 实验1 大肠杆菌的培养和分离 ——基础知识和操作过程梳理[来源:学科网] 大肠杆菌是　　　　　　　　　　　　的肠道杆菌。在肠道中一般对人无害，但任何大肠杆菌进入人的　　　　　，都会对人体产生危害。大肠杆菌在基因工程技术中被广泛的应用，它的　质粒　是最常用的运载体，它也是基因工程中常用的　受体细胞。 （单细胞的原核　无成型　肽聚糖　革兰氏阴性、异养兼性厌氧型） 二、培养基配置 微生物的生命活动需要　五大营养要素　，即：　　　　　　　　　　　　　　　　　　。有的化合物既是碳源又是氮源，如　蛋白质　。　　　　　　　是微生物生长不可缺少的微量有机物，但不一定需要外界补充，有的微生物可以自身合成。不同的微生物，其五大营养要素需求也不同，如固氮细菌的培养基中不需添加　　　源，因为它可以利用空气中的氮气；硝化细菌的培养基中不需添加　　　源，因为它可以利用空气中的二氧化碳合成有机物。 在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要适宜的　　　　　　　　　　　　　　　，以满足微生物生长对的要求。 培养基的种类及作用： 划分 标准 培养基种类 特点 用途 按物理性质分 液体培养基 不加凝固剂 工业生产、扩大培养 半固体培养基 加凝固剂，如琼脂 运动、保藏菌种 固体培养基 分离、鉴定、计数 按成分来源分 天然培养基 化学成分是天然物质 工业生产 合成培养基 将所需化学成分按需要和比例配制而成 分类、鉴定 按用途分 选择培养基 抑制不需要的微生物生长，促进所需微生物生长 如培养基中加青霉素，可选出酵母菌、霉菌等真菌，而细菌则不能生长 鉴定培养基 加入某种化学物质或显色剂，鉴别不同种类的微生物 如培养基中加伊红美蓝试剂，可鉴别饮用水等食品中是否有大肠杆菌，若有，则菌落呈深紫色，带金属光泽 我们一般用　　　　　　　　来扩大培养大肠杆菌，用　　　　　　　　来分离大肠杆菌。以下为本实验中培养基配置步骤： 1．称量：准确称取各成分。蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g，加水50ml。配置LB固体培养基时还需加1g琼脂。 2．溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到50mL。配置LB固体培养基时还需加琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。 3．调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。 4．灭菌：在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基，加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。 5．倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。 倒过来放置的目的是　防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面，以免污染培养基或不能分离出单菌落　。向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。否则，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。 （碳源、氮源、生长因子、无机盐和水　生长因子　氮　碳　pH、温度以及特殊营养物质、氧气　LB液体培养基　LB固体培养基） 三、灭菌和消毒 1．无菌技术：①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 2．消毒方法：①日常生活经常用到的是　煮沸消毒法　；②对一些不耐高温的液体，则使用　巴氏消毒法（80℃，煮15分钟）　；③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液进行化学消毒　，然后使用紫外线进行　物理消毒　，以增强消毒效果；④实验操作者的双手使用酒精进行　化学消毒　。 3．灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用　灼烧灭菌法　；②培养基、无菌水等使用　高压蒸汽灭菌法　，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；③对不能受潮的实验器具使用　干热灭菌法。 4．比较消毒和灭菌： 比较项 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 消毒 较为温和 部分生活状态的微生物 不能[ 灭菌 强烈 全部微生物 能 5．注意事项：①实验中用的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易