第八章吸光光度法(2010.11).pptVIP

吸光光度法 一. 概述 二.吸光光度法原理 1. 物质对光的选择性吸收 2. 光的吸收定律 (1) Beer-Lanbert定律 (2) 吸光度光度法 (3) 偏离光吸收定律的原因 三. 仪器和方法 四. 显色反应和显色条件的选择 五.测定条件的选择 六.具体应用 适用于分析半微量和微量的物质 一. 概述 吸光光度法: 基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法 适用面广 快速、简便 灵敏度高，最小检测浓度可达ppm级 准确度较高，测量误差为2-5% 二 . 吸光光度法的基本原理 黄 绿 青 青蓝 蓝 紫 红 橙 互补光的对应关系 光的互补：蓝?黄 可见光区的划分 : 400 450 500 550 600 650 760 λ/nm 1.可见光与颜色 2. 物质对光的选择性吸收 复合光 吸收(部分)光 透过光 全部吸收 物质呈现 颜色 物质呈现无色 全部不吸收 物质呈现黑色 透过光 透过光 + 吸收光 = 复合光 互补光 （3）同一物质不同浓度的吸收曲线形状不同, 但λmax 不变; （4） λmax有特征性，可作为定性依据。 （1）同一物质对不同波长光的吸收程度不同; （2）每种物质都有一个最大吸收波长(λmax); 信息： 3. 物质对光的选择性吸收及吸收曲线 λmax 4. Beer - Lambert定律——光吸收定律 A——吸光度 Io ——入射光强度 K——吸光系数 I——透射光强度 b——光程距离 c——浓度 A ∝ cb 当 b 一定时， A ∝ c，可以定量 吸收光 ， A ， 物质浓度 讨论 : （1） 物质不吸光， I=Io ， A=0 物质吸收部分光， I＜Io， A＞0 （2） A具有加和性，A总=A1+A2+…… +An （3）光吸收定律的应用条件 稀溶液 入射光为单色光 （4）亦可用透射光强度(透射率T%)表示 T %的含义： 物质不吸收光 I=Io ， T% =100% 物质吸收部分光， I＜Io ，T%＜100% 物质吸收光 ，T% ，物质的浓度 （5） 吸光系数的二种表示形式 浓度为1g/L的溶液，在某波长时，用1cm的比色皿，所测得的吸光度 浓度为1mol/L的溶液，在某波长时，用1cm的比色皿，所测得的吸光度 吸光系数K 摩尔吸光系数ε 意义 单位 L/g·cm L/ mol ·cm A=Kcb A= ?cb （1）吸收物质在一定波长和溶剂下的特征常数 （2）不随浓度c和光程长度b的改变而改变 （3）同一吸收物质在不同波长下的κ值是不同的 （4）κmax越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。 吸收系数κ的讨论 κ 105： 超高灵敏； κ = (6~10）×104：高灵敏； κ = 104~103： 中等灵敏； κ 103： 不灵敏。 5. 偏离Beer-Lanbert定律的原因 出现的现象： A c 产生原因： a. 单色光不纯 在高浓度端， 工作曲线呈弯曲状。 A与C偏离线性 现有仪器无法获得纯单色光，只能获得小 范围的复合光。 按光吸收定律: Io Io1 Io2 I1 I2 I 试样 若入射光包含λ1和λ2二种波长光, 当照射试样后 讨论 : 当为纯单色光时， A总=ελ1cb 当单色光不纯时， λ1=λ2 ελ1=ελ2 A总∝ c 线性破坏 结论： 单色光纯度越差，线性越差 λ1=λ2 ελ1=ελ2 二 . 吸光光度法的基本原理 减少单色光不纯引起偏差方法 ——— 在?max处测量 ?在?max 处 单色光不纯 但 ?ε→0 测量误差较小 b. 溶液本身引起的偏差 若溶液浓度＞0.01mol·L-1时，粒子间的相互作用 溶液以胶体、乳浊、悬浮状态存在时，有反射、散射作用 例 : (橙色) (黄色) λmax=450nm A总 包括离解、缔合、生成新物质、形成异构体 使原物质浓度改变 吸光度值变化 产生偏离 pH ， 平衡 移, c. 溶液内部的化学变化 基本组成： 三. 分光光度计 光源 复合光 单色器 单色光 吸收池 单色光 检测器 信号处理与显示 I0 It  图8-6 分光光度计组件示意图 1、光源 (钨灯、氢