包埋保藏菌种与传统试管种菌种活力的测定比较.pdf

育 种 驯 化 《 龟 圈苗 2014(3) 包埋保藏菌种与传统试 管种 菌种活力的测定 比较 李凤美 刘连强 罗 莹 訾惠君 (天津市林业果树研究所，天津300384) 摘 要 对香菇、猴头菇、杏鲍菇和 白灵菇四种食用菌的包埋菌 1．2．2 茵丝吃料情况的测定 将原种栽培料分装于大试管 种4~C低温保藏一年，对保藏后的菌株进行菌丝恢复培养，对生 中，灭菌接种后 ，置于25℃恒温培养箱 ，菌丝长满上层料面后 长速度 、栽培料发菌吃料情况、液体菌种纤维素酶和漆酶对 比观 第 15天对比观察各菌株菌丝吃料深度、长势情况。 察，以传统试管保藏法为对照，试验结果表明采用包埋法保藏的 1．2_3 菌丝胞外酶液制备 取供试菌株 ，活化培养后转 菌种 ，菌丝活力较为旺盛 ，菌种活力没有明显的衰退变化。 接于含 100mLPDA液体培养基的三角瓶 中，在25℃摇床 关键词 包埋菌种 保藏方法 菌种活力 160rm／in培养 15d，从第5天开始每隔1d取 1次样。取出的 文章编号 1000—8357(2014)03—0024—02 样 品于5000r／min4~C离心 10rain，取上清液即粗酶液 。每瓶 对食用菌菌种活力的考察，可通过检测与菌丝体降解基 5重复。 质相关的胞外酶的活力来评判。食用菌栽培所用碳源主要 1．2．4 纤维素酶活性测定 ①取 1．5mL0．05mol／LpH5．0柠 是木屑、秸秆 、稻草等富含纤维素、半纤维素、木质素的物质， 檬酸缓 冲液 (内含 0．5I％CMC)，酶液 0．5mL，于 50％水浴 食用菌分泌的胞外酶能将这些大分子物质分解成小分子物 30min，迅速加人 1．5mL3，5二硝基水杨酸试剂 以钝化酶活 质而利用，说明食用菌含有丰富的纤维素酶和漆酶，通常纤 性，于沸水 中煮沸 10min进行显色反应 ，加入 1．5mL蒸馏水 ， 维素酶和漆酶可作为检验菌种活力强弱的指标之一 ，酶含量 冷却后摇匀，于540am波长下测其 OD值 ，用沸水浴 10rain 高的菌种是活力强、生物转化率高的丰产菌种uI。 灭活的酶液作空白对照。②绘制葡萄糖标准曲线：以每克干 食用菌包埋菌种是指将食用菌液体菌种采用包埋法固 物质每三十分钟催化水解生成 tmg葡萄糖所需的酶量为一 定在凝胶网格结构中或半透性聚合薄膜 内 ，形成便于保藏 个酶活单位U。 和运输 的颗粒食用菌种子 。试验采用海藻酸钠对4种不 同食 1．2．5 漆酶活性测定 0．1mol／LpH4．0的乙酸缓冲液3．4mL， 用菌液体菌种进行包埋，包埋菌种颗粒采用真空包装袋包 加入 3．36mM的邻联 甲苯胺 0．5mL，再加入粗酶液0．5mL， 装，在4~C低温存放 1年后取出，分别从菌丝恢复生长速度，从 28~C保温 30rain，测 600nm波长处的OD值。定义每分钟引 栽培料的吃料情况，以及羧 甲基纤维素酶(CMC酶)和漆酶活 起O．O1个吸光度的增加所需的酶量为一个酶活力单位 (U)。 性进行分析，以传统的试管保藏的菌种作为对照 ，对包埋菌 2 结果与分析 种的保藏效果进行评价。 2．1 菌丝生长情况对 比 详见图1。由图1可以看出不同方 1 材料与方法 法保存菌种效果不同，且存在明显差异。采用包埋法保藏的 1．1 供试材料 ①菌种 ：猴头菇 (Hericium