成年大鼠心肌细胞培养方法的建立和形态学观察.pdfVIP

2000 年 　6 月 首 都 医 科 大 学 学 报 J un. 2000 第 21 卷 　第 2 期 Journal of Capital Universit y of Medical Sciences Vol. 21 　No. 2 成年大鼠心肌细胞培养方法 的建立和形态学观察 北京心肺血管疾病研究所细胞免疫室 许秀芳 　李温斌 　陈宝田 　吕燕宁 　赵莉敏 　陈　燕 ( ) 提要 : 为探索稳定的成年大鼠心肌细胞的分离和培养方法 ,应用生物酶 5 g/ L 胰蛋白酶及 1 g/ L 胶原酶 灌注法 分离成年大鼠心肌细胞 ,用形态学及台盼蓝染色法鉴定分离的心肌细胞 ,并在光镜和电镜下观察和摄像记录 。结果 : 心肌细胞的存活率为 91. 7 % ;存活的心肌细胞静止地贴在培养板底上 ,细胞完整 ,呈杆状 ,长宽比约为 4 ～6 ∶1 。结果 提示 :该方法是比较理想的心肌细胞培养法 。 关键词 : 成年大鼠心肌细胞 ; 胰蛋白酶 ; 胶原酶 ; 分离技术 中图分类号 : Q253 ; R322. 1 + 1 　　自从 1953 年 Durrows 和 Moscona 首次成 菌 。酶消化液 :胶原酶 0. 1 g 加胰蛋 白酶 0. 5 功地应用生物酶分离出鸡胚心肌细胞后[1 ] ,其 g 、牛血清 白蛋白 1 g ,加入 DMEM 培养液 100 分离培养技术不断发展 ,逐渐发展为 3 种分离 mL ,于使用前配制 。 方法 :离体心脏灌注法 、心肌细胞浸泡法和贴块 1. 2 　方法 培养法 。对动物而言 ,离体心脏生物酶灌注法 采用离体心脏灌注法分离心肌细胞[2 ,3 ] 。 分离心肌细胞的质量及数量最佳 。成年心肌细 Wistar 大鼠腹腔注射 2 %戊巴比妥钠麻醉 胞的分离较幼年及新生动物心肌细胞的分离更 (含 1 ∶200 肝素 45 mg/ kg) ,麻醉满意后胸腹部 为困难 ,但成年心肌细胞做为一种生物学实验 用 75 %乙醇消毒 ,“U ”字形切开腹壁 ,快速剪断 工具是其他心肌细胞不可替代的。国内仅有少 左右前腔静脉及后腔静脉 ,经升主动脉根部灌 数单位分离培养成功成年动物心肌细胞 。1992 注 4 ℃高钾安贞 Ⅱ号心脏停跳液 30 mL ,待心 年 1 月至 1998 年 12 月 ,我们建立了成年大鼠 脏停跳呈灰白色后取下心脏 ,接在 Langendorff 心肌细胞分离培养方法并进行了形态学观察 。 灌注架上 ,按下列步骤进行实验 : 1) 清洗心脏 : 用无 Ca2 + 、Mg2 + 的 DHank 1 　材料和方法 液灌洗心脏 5 min 即可 ; 目的是解离桥粒和细 胞间连结 。由于 Ca2 + 在心肌细胞连结上起重 1. 1 　材料 要作用 ,用无 Ca2 + 的液体灌洗心脏能带走大量 实验 动 物 为 成 年 Wistar 大 鼠, 体 质 量 的 Ca2 + ,心肌细胞间糖蛋白被破坏 ,桥粒和连 150～200 g , 由本研究所实验动物室提供 。 结随之解离 。 DMEM 培 养 液 、胰 蛋 白酶均购 自美 国