等电聚焦电泳技术分析玉米品种纯度简报.pdfVIP

研究论文 寸阁种 米品种纯度 艮 柳淑清 (河北省承德裕丰种业有限公司，067400) 品种纯度是玉米种子四大指标之一，目前我国鉴 30％丙烯酰胺 、40％蔗糖、甘 一T、四甲基乙二胺、水、 定玉米品种纯度的方法是采用小区种植鉴定法。此方 载体 、1％过硫酸铵按一定比例配制成混合液 ，将混 法用时长，对于种子企业来说，小区种植鉴定是一种后 合液用注射器注入玻璃板内，静置 40min左右，待胶 补的方法，要到下一年才能确定品种纯度 ，从而影响种 板凝结，将胶板放置 4℃左右空间储存一夜 ，第 2天 子的销售工作。为了给种子企业赢取销售时间，下面 使用。 介绍一种室内电泳纯度鉴定方法——等电聚焦电泳。 1．3 准备样品 将所需品种承玉 10、承玉 l8分批次 1 等电聚焦电泳方法 留取样品，每批次取净种子 100粒，将数取好的样品放 1．1 仪器设备和试剂配制 该方法需电泳仪、电泳槽、 水中浸泡2h左右，泡软后用刻刀将种胚取出，放离心 注射器、烧杯、量筒、试管、漏斗、滤纸、刻刀、移液器、玻 管里加适量蔗糖溶液，将胚液研磨成匀浆，放冰箱冷冻 璃板、电冰箱等。 一 夜，第2天使用。 试剂配制为：蒸馏水；电极缓冲液，正极缓冲液 1．4 电泳 将准备好的胶板取出，揭取上层玻璃板，将 (1mol／LH3PO4)11．5mL85％磷 酸加 水 至 100mL，负 准备好的样品溶液取出；将0．5cm左右宽的滤纸条蘸上 极缓冲液(1mol／LNaOH)4g氢氧化钠加水至 10mL； 样品溶液，匀距离放在胶板上；将点好样的胶板加上正 样品提取液为40％蔗糖溶液；顺丁烯二酸缓冲液为 负极缓冲液放到电泳槽，开始电泳；4～5h后电泳结束， 3．08gNaOH+5．8g顺丁烯二酸加水至 lO00mL；1％ 一 取出胶板放到顺丁烯二酸缓冲液中，加入 1％ 一萘酯 萘酯为 lg醋酸一0一【萘酯加 lOOmL正丁醇；7％冰醋 混匀，加人固蓝RR盐少许，进行染色；将染好色的胶板 酸为70mL冰醋酸加水至 1000mL。 放到观片灯上分析谱带，记录好结果。 1．2 凝胶板配制 将 2块干净玻璃板叠放在一起 ， 对 2010年、2011年、2012年所产承玉 10、承玉 之间用 0．5era厚度的胶条进行四边密封 ，一端留有 l8采用等电聚焦法和小区种植鉴定法鉴定结果进行比 小 口用来灌胶 ，然后用夹子将玻璃板四周 固定好 ；将 对(表 1)。 表 1 等电聚焦法及小区种植鉴定法鉴定结果比较 (％) 从表 1可以看到用等电聚焦电泳法和小区种植鉴 分析承玉 10、承玉 l8的纯度。希望这种简便快捷的电 定法鉴定 3年所产的承玉 l0、承玉 18不同批次的样品 泳法能服务于更多的品种、更多的企业。 纯度，无大的差距，因而本文认为用等电聚焦电泳法可 (收稿 El期：2014—03．20) 热带作物学报 2014，35(10)：1969—1974 ChineseJournalofTropicalCrops 番茄S1ARF2基因表达模式及其 在果实发育中的功能分析 杨 枭，任振新 ，林冬波，先志强，李正国 妻重庆享市高校功能鑫基篙因蔫与簧调控囊新技术重点实墓验室 重王庆400030 摘 要