DC法快撕唾测定微生物学.pptVIP

实验 水中大肠杆菌测定 DC法快速测定 一、实验目的 1、掌握大肠菌群DC检测方法。 2、测出自来水中大肠杆菌数。 二、实验原理 大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，可以使培养基发生变色或崩裂现象。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中的大肠菌群数系以1ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。 三、实验方法 DC半固体试管快速法 四、实验器材 1、试剂及药品：10%去氧胆酸钠水溶液 0.4%BTB 安氏指示剂（酸性品红0.5g NaOH16ml 溶于蒸馏水100ml）蛋白胨（优质） 氧化钠 乳糖 K2HPO4.3H2O 柠檬酸铁铵 琼脂条 蒸馏水100ml 2、材料及设备： 试管11支 吸量管4支 （1ml3支、 10ml1支） 洗耳球 烧杯 锥形瓶 牛皮纸 酒精灯 天平 水浴锅 恒温箱 电炉 自来水等 关于BTB C27H28O5Br2S 用于检测酸碱性的PH值的溶液。 BTB试剂是「溴瑞香草酚蓝（Bromothymol Blue）试剂的简称，也叫做「溴麝香草酚兰」试剂。 BTB试剂遇到碱性溶液会形成蓝色溶液，BTB试剂遇到酸性溶液会形成绿色溶液。 其配制方法：溴麝香草酚蓝0.04g?????0.01mol/LNaOH?6.4mL?溶于93.6mL蒸馏水?。 流程图 五、实验步骤 1、流程图 2、详细步骤 2、详细步骤 （1）将所有该实验中需要的器皿进行清洗和灭菌 （2）培养基制备：蛋白胨（优质）4.5g、氧化钠1.5g、乳糖3g、K2HPO4.3H2O 0.9g柠檬酸铁铵0.6g、琼脂条2.4g溶于蒸馏水100ml加热，调整pH7.2，随即加入0.4%BTB4.8ml 安氏指示剂6ml和10%去氧胆酸钠水溶液1ml，最后煮沸3mim备用. （3）生理盐水配制：NaCl0.9g,蒸馏水100ml （4）样品处理：取自来水时，需先用清洁布将水龙头擦干，再用酒精灯灼烧水龙头灭菌，然后把水龙头完全打开，放水5—10min后再将水龙头关小，采集水样。经常取水的水龙头放水1--3min即可采集水样。 （5）稀释：用1ml灭菌吸量管吸取原液1ml注入含有9ml生理盐水的试管内，振摇试管均匀，做成1：10的稀释液；另取1ml灭菌吸管，从1：10溶液注入的稀释液中吸取1ml做1：100的稀释液。 （6）加入培养基与培养：接种1ml样品的试管，注入已溶化并冷至50℃左右DC半固体培养基3ml。接种10ml样品的试管加入3倍DC培养基5ml,立即将样品与培养基充分混匀，待凝固后，37 ℃培养18-24h，取出观察结果。 六、结果判断 培养基变橘红色，有气泡产生或琼脂崩裂,为强阳性 培或有橘红色菌落，无气泡和琼脂崩裂现象为阳性 培养基为绿色，有黄色菌落无气泡和琼脂崩裂现象为弱阳性 培养基为绿色，为阴性 七、报告结果 根据判定结果，记录阳性管数，直接查对MPN检索表，做报告 如遇“结果判定”第三条反映结果，可挑2-3个可疑大肠杆菌菌落接种乳糖复发酵管，置37 ℃温箱18-24h，根据产酸产气管数查对MPN检索表，做报告。 八、注意事项 制备DC培养基不需要高压灭菌，做好后培养基为绿色。未用完DC琼脂可加热煮沸，待冷后保存于冰箱中继续使用，有效期为一周。 3倍DC半固体培养基，除蒸馏水用量不变外，其它成分均按3倍量加入。 制备DC培养基，其中10%去氧胆酸钠水溶液要求在校正pH后加入，以免发生胆酸沉淀。是 自来水取样时一定要按照国家标准方法进行，否则无可信度 一定要注意在无菌条件下进行，以免其它细菌滋生。 * * 水样 稀释 DC培养基 培养基变橘红色 有气泡产生或 琼脂崩裂,为强阳性 培养基或有橘红色菌落 无气泡和琼脂崩裂 现象为阳性 培养基为绿色 有黄色菌落 无气泡和琼脂 崩裂现象为弱阳性 培养基为绿色 为阴性 报告 报告 乳糖胆盐发酵 报告 产气为阳性 不产气为阴性 报告 报告