剖析分子荧光分析新技术.pptVIP

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2017-11-08 发布于湖北
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剖析分子荧光分析新技术.ppt

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分子荧光分析新技术

2. 溶剂的拉曼光及其对荧光光谱的干扰拉曼光没有确定的波长，但它的频率和激发光的频率却有一定的差值。例：在不同汞射线照射下水的拉曼光的波长 λ ex(nm) 248 313 365 405 436 水（Q） 271 350 416 469 511 ⊿波数（μ-1） 0.339 0.339 0.340 0.335 (1)差别 ① 荧光有一定的波长，而与激发光的频率无关，拉曼光随着激发波长而改变； ② 拉曼光发生的时间比荧光快一千万倍； ③ 拉曼光强度很弱。表1 在不同汞射线照射下数种主要溶剂的拉曼光波长 solvent λ ex(nm) 248 313 365 405 436 水 271 350 416 469 511 乙醇 267 344 409 459 500 环己烷 267 344 408 458 499 四氯化碳 - 320 375 418 450 氯仿 - 346 410 461 502 表2 在不同汞射线照射下拉曼光与激发光的波数差值（μ-1） solvent λ ex(nm) 平均差值(μ-1) 248 313 365 465 水 0.339 0.339 0.340 0.335 0.338 甲醇 0.292 0.292 0.293 0.290 0.292 0.143 0.143 0.141 0.134 0.140 环己烷 0.287 0.287 0.291 0.285 0.288 0.137 0.138 0.135 0.132 0.136 四氯化碳 - 0.073 0.079 0.071 0.074 氯仿 - 0.073 0.073 0.065 0.070 - 0.301 0.301 0.304 0.302 （2）拉曼谱线与激发光的频率差值及波数差值是分子的振动能级与转动能级跃迁的结果，拉曼光的频率和激发光的频率之间的差值相当于分子的振动－转动频率，对于某一给定的物质，频率差值是恒定不变的，而和激发光的频率无关。 First EES Laser frequency（vitual ES） 0 218 314 459 762 790 hυ0 hυ0 hυ0 hυ0 Stokes h(υ0-υυ ) antistokes ≈ （3）拉曼光的消除 ① 选择适当的溶剂 ② 选用合适的激发光波长 ⊿E=ε= hυ=h υ=h §4.2 三维荧光光谱法 Total Luminescence Spectrometry 一般荧光法对复杂混合物荧光光谱难以分辨，因而使它的应用受到限制。 F是λex、λem的函数。 Total luminescence（TLS） Two-dimensional spectra（TDS） Topograms 一. 三维荧光光谱图的表示方法 1. 三维投影图（isometric projection）以λem为x轴， λex为y轴，F为z轴而构成的三维投影图。 y轴λ由小到大正面图 y轴λ由大到小背面图 2. 等高线图（contour plats）以λem为x轴， λex为y轴，把荧光强度相等的点用线连接起来，则在平面上形成等高线图，称为等高线荧