优质课-生物选修1-DNA的粗提取.ppt

* 专题5：DNA和蛋白质技术 舞钢一高 罗瑞锋 DNA的粗提取和鉴定 蛋白质 DNA 染色体 1．尝试对植物或动物细胞组织中的DNA进行粗提取 2．知道DNA的物理化学性质 3．明确DNA的粗提取和鉴定的原理 【实验目的】 ①DNA主要分布于细胞的什么位置？ ②DNA是生物大分子，怎样把它与其它物质分开，并从细胞中提取出来呢？ 对于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA与RNA 、蛋白质、脂质等在物理和化学性质上的差异，提取出DNA，去除其他成分。 ②再选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 ①先破碎细胞 DNA与蛋白质等生物大分子的理化性质，有何差异？ DNA在NaCl溶液中的 溶解度曲线 当NaCl溶液的浓度低于0.14mol/L时， DNA的溶解度随着随着NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低； 在0.14mol/L的NaCl溶液中， DNA溶解度最低。 当NaCl的溶液浓度大于0.14mol/L时，DNA的溶解度随着NaCl溶液浓度的增加而逐渐增加。 蛋白质等其它生物大分子，在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度，也是最低的吗？ 蛋白质在低浓度的盐溶液中，溶解度增高，叫蛋白质的盐溶。 蛋白质在高浓度的盐溶液中，溶解度降低而析出，叫盐析。 【DNA粗提取的原理】 【进一步提纯DNA的原理】 DNA不溶于酒精溶液，但细胞内的某些蛋白质则溶于酒精。利用该原理，可将DNA与蛋白质进一步分离。 95% 冷酒精 DNA 丝状物 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60～800C的高温，而DNA在800C以上才会变性 ③洗涤剂能够瓦解细胞膜，去除脂质和蛋白质，但对DNA没有影响 在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色 对照组： 2mol/L的NaCl溶液 ＋ 二苯胺 实验组： 2mol/L的NaCl溶液 ＋ DNA ＋ 二苯胺 ②甲基绿 （绿色） 【实验流程】 选材 去除滤液中的杂质 析出 DNA 鉴定 DNA 破碎细胞滤取含DNA的滤液 菜花、香蕉、洋葱（紫色）、菠菜、豌豆、哺乳动物血细胞、鸡血细胞、猪肝、培养液中的大肠杆菌 从以下材料中，选出你认为最适合用DNA粗提取和鉴定的，并说出理由？ DNA含量高、易破碎、无颜色干扰的生物组织最好 哺乳动物的红细胞（量大）没有细胞核，白细胞有细胞核（量少），因此哺乳动物血液中DNA含量少。 1、破碎动物细胞，滤取含DNA的滤液 柠檬酸钠的作用？ 静置分层的目的? 能否用哺乳动物的血细胞，替代鸡血细胞? 不好，因为哺乳动物的红细胞没有细胞核，只有白细胞有细胞核，因此哺乳动物血细胞中DNA含量低 在500mL大烧杯中，加入10%的柠檬酸钠100ml,注入新鲜鸡血180mL，边加边搅拌，以免凝血。4000r/min离心2min或放入冰箱中静置1d. 血细胞 血浆 操作： 防止血液凝固 获得鸡血细胞液 （1）鸡血的离心（静止）分层 把吸管深入瓶底， 吸取鸡血细胞； 转移到小烧杯中 鸡血细胞液 为什么用鸡血细胞液而不用鸡全血？ 鸡全血约含50%的血浆（没有DNA） 等量的全血提取的DNA量比鸡血细胞少 （2）吸取鸡血细胞液 为何要，加蒸馏水并用玻璃棒沿1个方向快速搅拌？ 用渗透吸水的方法破碎细胞，获取核物质（含DNA） 加蒸馏水 快速搅拌 核物质 （3）破碎细胞，过滤获取含DNA的核物质滤液 将制备好的鸡血细胞10mL，注入50mL小烧杯中，再加入20mL蒸馏水，同时沿一个方向快速搅拌5min，加速血细胞破裂。然后用放有3 ～4层沙布的漏斗过滤至1000mL烧杯中，得到含核物质的滤液。 研磨：破碎细胞 冷冻处理幼嫩植物材料 2、破碎植物细胞，滤取含DNA的核物质滤液 研磨液主要成分： SDS（洗涤剂）： 使蛋白质变性，瓦解细胞膜，同时分离蛋白质与DNA EDTA （DNA酶抑制剂） ： 抑制DNA酶活性， 防止DNA被水解。 缓冲体系（Tris-HCl） 加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 洗涤剂是一种离子去污剂，能溶解细胞膜有利用DNA的释放； 食盐是成分NaCI，有利用DNA的溶解 如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ ①如果研磨不充分，会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物。 ②在用二苯胺鉴定时，不能显示蓝色。 1、溶解细胞内的DNA和其他物质 量取2mol/L的NaCl溶液40mL加入滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使其中的DNA和其他物质充分溶解。 向滤液中加入2mol/L的NaCL溶液的作用是什么？ 溶解细胞内的DNA和其他物质 这时，溶液中NaCl的物质的量浓度，相当于0.14mol/L 沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用