创伤弧菌Vibriovulnificus蓝色萤光蛋白之特性研究.PDFVIP

理 : Vibrio vulnificus藍 :CNIS-88-02 行:87 年9 1 88 年6 30 類 : : : ; 連 pBR322 Vibrio vulnificus 2.7 kb DNA DNA 了 藍 (BFP) (bfp) bfpEscherichia coli XL1B UV (340nm) 藍 了DNA 1.4kb pUC19 了了度 不 利 Vibrio vulnificus 藍 不類力[1 2 3] 不(homologous)[4] 留不不類 [5] (Lase) 利 (luciferin) (chromophore) 輻量 [6 7] 不 luciferin / Lase 1 system 不 [5] 藍 不類離來[4] 北 綠 [8] 兩 (aequorin) 綠 (green fluorescent protein)(GFP) [8] 年來 兩 [9] GFP 1992 年cDNA 來[10] GFP 不 UV (395nm) 綠 GFP X 度更 便 [11 12] 利 reporter [13] marker[14] fusion tag protein 來便力 protein tag利 [15] (Vibrio vulnificus) 藍 (bfp) , 了藍 (BFP) UV藍 BFP reporter tag 立更 泥 料 () 離 Vibrio vulnificus CKM-1 V. vulnificus DNA Sau3A1切 (partial digestion) BamH1 切 PBR322 (transformation)E. coli MC1061 落數 10,000 Clarke Carbon P 99% 了 [16] 來行 (transformation) E. coli MC1061 (araD139) 7697 – – – – q r lacx17galU galK hsr hsm strA) E. coli XL1B F Tn10 proA B lac1 (lacZ) M15/recA1 endA1 gyrA96 (Na1 ) thi hsdR17 (r m )supE44 relA11ac LB (Luria-Bertani medium) 1% Bacto-tryptone, 0.5% bacto-yeast extract 1% NaCl () DNA (transformation) 20 ml LB 37 10 ml Low buffer ( 10 mM Mops, 10 mM RbCl, pH 7.0 ) 10 ml High buffer ( 10 mM Mops, 10 mM RbCl, 50 mM CaCl , pH 6.5 ) 4 2 30 ~ 60 5000 rpm 4 離5 2 ml High buffer pellet 100 ul量 DNA 430~60 43 30 DNA 1 ml LB 371 50 ul ( LB + Ampicillin ) 37 () DNA DNA 20 ml (LB+