淀粉酶法测定氯离子.PPT

第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质 * 第五节 酶激活和酶抑制测定法 一、无机离子 （一）测定原理 1、丙酮酸激酶法测定钾离子 磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）＋ADP＋K 丙酮酸＋ATP ＋ PK 丙酮酸＋NADH＋H NAD ＋乳酸 ＋ ＋ LDH 2、β-半乳糖苷酶法测定钠离子 邻硝基苯-β-D-半乳糖（ONPG）＋Na 半乳糖＋邻硝基苯酚 β-半乳糖苷酶 ＋ 3、淀粉酶法测定氯离子 2-氯-4-硝基苯- α-D-麦芽三糖苷（CNP-G3）＋Cl CNP＋G3 α-AMY - 4、异柠檬酸脱氢酶法测定镁离子 异柠檬酸＋NADP ＋Mg α-酮戊二酸＋CO2＋NADPH＋H 2+ 异柠檬酸脱氢酶 （二）方法性能评价 酶激活法检测无机离子时，具有酶法常有的优点且抗干扰能力强。测定钾离子要注意：当氨离子在有锰或镁离子存在时对PK有显著激活作用，故需用GDH消除氨离子的干扰。淀粉酶法测定氯离子，其线性范围宽，特异性与稳定性好，抗干扰能力强，不受卤族元素溴、碘及硫氰酸等阴离子的干扰。 ＋ 二、微量元素 （一）超氧化物歧化酶法测定铜离子 黄嘌呤＋O2 H2O2 ＋2O2 ＋ 尿酸 XO － O2＋NBT 甲臜（蓝色）＋2O2 － O2 ＋Cu O2 ＋H2O － SOD (二）碳酸酐酶法测定锌离子 醋酸对硝基酚 对硝基酚＋CH3COOH 碳酸酐酶 Zn 三、有机磷 （一）测定方法概述 色谱法：检测准确、灵敏度高，但是成本高，耗时长。 波谱法：干扰因素多，灵敏度不高，一般只作为鉴别方法 的粗选。 酶抑制法：操作简便、快速、适合现场检测和大批样品筛 选检测。 （二）测定原理： 有机磷农药的毒性抑制乙酰胆碱酯酶催化底物水解生成乙酸和胆碱，胆碱与5,5-二硫代-双-2-硝基苯甲酸反应，生成黄色产物5-硫代-2-硝基苯甲酸，在410nm处有最大吸收，测定它在单位时间内的生成量，即可测得乙酰胆碱酯酶的活性。当待测物中含有有机磷时反应受到抑制，乙酰胆碱酯酶活性降低，吸光度与有机磷浓度成反比。 乙酰胆碱 乙酸＋胆碱 胆碱＋5,5-二硫代-双-2-硝基苯甲酸 5-硫代-2-硝基苯甲酸 （三）方法性能评价 酶抑制法检测有机磷农药相对于传统的波谱法在简便、快速和检测成本低等方面有比较大的优越性。 乙酰胆碱酯酶 * * *