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2017-11-03 发布于天津
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基因克隆-汉恒生物

基因克隆基因克隆 (1) 目的基因片断扩增 1．引物设计利用 DNAMAN 等软件设计合适的引物, 并根据目的基因内切酶位点分析结果，分别在正、反向引物的 5’ 端加上相应酶切位点，并分别加上内切酶保护碱基。 2．按照如下体系进行 PCR 扩增，测试引物 ddH O 16.0 ul 2 2+ 10×PCRbuffer(with 15uM Mg ) 2.0ul dNTP(10mM) 0.4ul primer(F/R；10uM) 0.4ul Template DNA(100ng/ul) 1.0ul Taq(5U/ul) 0.2ul 25 汉恒生物科技 (上海)有限公司 400-092-0065 地址：上海市徐汇区斜土路 1175 号景泰大厦 1503 021 实验室：上海市张江高科技园区张江药谷孵化器 1 号楼 314 汉恒生物科技邮箱：service@ 基因克隆 94℃ 5min 94℃ 30s Tm-2℃ 30s 35-40 cycles 72℃ 1min/kb 72℃ 10min 扩增产物用 1%琼脂糖凝胶电泳检测。 3. 按照如下体系高保真扩增启动子 DNA 50ul 体系： ddH O 33.5 ul 2 KOD-plus 10×PCR buffer 5.0ul MgSO (25mM) 2.0ul 4 dNTP(2mM) 5.0ul primer(F/R；10uM) 1.5ul