成熟软骨细胞促进小鼠胚胎干细胞向软骨分化-中国科学杂志社.pdfVIP

中国科学 C 辑 :生命科学 2008 年 第 38 卷 第 9 期 : 783 ~ 786 SCIENCE IN CHINA PRESS 成熟软骨细胞促进小鼠胚胎干细胞向软骨分化 * * 谢峰, 张文杰, 陈凡凡, 周广东, 崔磊, 刘伟, 曹谊林 上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科, 组织工程国家工程研究中心, 上海 200011 * 联系人, E-mail: wenjieboshi@; yilincao@ 收稿日期: 2008-02-28; 接受日期: 2008-04-17 国家重点基础研究发展计划 (批准号：2005CB522705), 国家自然科学基金(批准号, 上海市浦江人才计划(批准号：05PJ14054) 和上海市曙光计划(批准号：06SG22)资助项目 摘要 为诱导胚胎干细胞向软骨细胞分化, 采用胚胎干细胞与成熟软骨细胞共培 关键词 养的方法以提供软骨诱导微环境. 小鼠胚胎干细胞经初步分化, 形成类胚体后, 从中 软骨细胞 分选出 Flk-1 阳性细胞, 其与猪关节软骨细胞混合后, 接种于可降解材料支架, 并植 共培养 入裸鼠皮下. 4 周后经组织学检查及型胶原抗体免疫荧光检查证实, 细胞材料复合 分化 胚胎干细胞(ES cells) 物形成软骨组织. 经小鼠主要组织相容性抗原染色, 证实其中部分软骨细胞源自于 小鼠胚胎干细胞. 本研究建立了胚胎干细胞定向诱导分化的新方法. 诱导胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES cells) 成熟的软骨细胞可诱导ES细胞向软骨细胞分化. 向特定细胞表型分化, 一直是干细胞研究中面临的 1 材料和方法 巨大挑战. 通常分化中有多种细胞因子参与, 诱导过 程需尽可能模仿特定细胞系的正常发育分化过程及 1.1 细胞培养和分选 微环境. 对于软骨细胞定向诱导, 骨形态发生蛋白 从猪关节获取成熟软骨细胞, 体外培养, 方法详 (BMPs)及转化生长因子(TGF-β)是已知的最有效的软 见参考文献[5]. 第 2 代软骨细胞被用以进行共培养. 骨分化诱导因子[1~3]. 然而, 在体外诱导中使用的诱 小鼠 ES 细胞(R1 细胞株) 的培养及类胚体(embryoid 导因子浓度远高于胚胎发育中的生理浓度, 这说明 bodies, EBs) 的形成方法详见参考文献[6]. 第 4 天, 类 现有的体外分化诱导体系不是最理想的. 胚体用 trypsin/EDTA (Sigma) 消化成单细胞悬液. 众所周知, 组织特殊微环境对细胞分化命运具 此细胞悬液用抗 Flk-1 (BD Pharmingen)抗体标记后, 有决定性意义. 为了模仿胚胎发育中的微环境, 细胞 用流式细胞仪(EPIC ALTRA, Beckman Coulter)分选 或组织共培养体系在许多研究中得到广泛应用. Sui 出Flk-1 阳性细胞. 等人[4]报道, 将ES 细胞同胚胎中分离出的肢芽细胞 共培养, 可成功诱导ES细胞向软骨细胞分化. 然而, 1.2 体内共培养实验 胚胎组织取材较困难. 本研究前期实验表明, 关节软 将第 4 天EBs细胞中, 未分选的EBs细胞、分选后 骨细胞可促使骨髓基质干细胞向软骨细胞分化[5],