利用合适的启动子提高外源基因在jurkat细胞中的-中国医药生物技术.pdfVIP

中国医药生物技术 2012 年 8 月第 7 卷第 4 期 Chin Med Biotechnol, August 2012, Vol. 7, No. 4 281 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.04.006 ·论著· 利用合适的启动子提高外源基因 在 Jurkat 细胞中的表达 袁娟，牟宗春，游佳，马维骏 【摘要】 的表达起着重要的调控作用。在真核生物中，不同 目的 通过选择合适的启动子来实现外源基因在 Jurkat 细 的转录因子可以与相应的启动子序列结合，从而精 胞中的高效表达。 确地调控基因表达的时间和水平[4] 。因此，选择具 方法 以 pGL3-MCS 质粒为基础构建不同启动子（SV40、 有高表达活性的启动子对驱动基因高效表达是非 CMV 、EF1α 和 UbC ）驱动萤火虫荧光素酶 Fluc 报告基 常关键的。在大多数哺乳动物细胞中，一般选择表 因表达的重组质粒，并将其与作为内参的表达海肾荧光素酶 达活性较强的病毒启动子[5-7] ，如猿猴病毒 40 Rluc 报告基因的质粒共转 Jurkat 细胞，检测 Jurkat 细胞 （simian virus 40，SV40）早期启动子、巨细胞病 中这两种荧光素酶与相应底物反应所产生的荧光强度，计算 毒（cytomegalovirus，CMV ）即刻早期启动子。但 Fluc 与 Rluc 荧光强度的比值即 Fluc 的相对酶活，通过比 是在有些哺乳动物细胞中，例如 Jurkat 细胞系中， 较 Fluc 相对酶活的大小来选取在 Jurkat 细胞中具有高表 SV40 和 CMV 启动子的活性并不高[8-9] 。而一些细 达活性的启动子。 胞启动子，如人源的延长因子 1α （elongation 结果 以 pGL3-MCS 质粒为基础成功构建了不同启动子 factor-1，EF1α）启动子、人源的泛素 C （ubiquitin C ，UbC ）启动子也是能高效表达外源基因的启动 驱动 Fluc 报告基因表达的重组质粒 pGL3-CMV 、 子[10-11] 。基于以上因素，我们利用荧光素酶双报告 pGL3-EF1α 和 pGL3-UbC 。在 Jurkat 细胞中，不同启动子 驱 动 的 Fluc 报 告 基 因的 相 对 酶 活 的 强 弱 关 系 为 基因系统检测 SV40 、CMV 启动子与 EF1α、UbC 启动子在 Jurkat 细胞中的相对活性，通过高活性 pGL3-UbC pGL3-EF1α pGL3-CMV pGL3-MCS 。 启动子来实现外源基因在 Jurkat 细胞中的高效表 结论 可以选择高活性的人源泛素 C 启动子实现外源基 达，以利于 Jurkat 细胞系在哺乳动物 T 淋巴细胞 因在 Jurkat 细胞中的高效表达，以利于 Jurkat 细胞系在哺 以及免疫相关功能研究中的应用。 乳动物 T 淋巴细胞以及免疫相关功能研究中的应用。 【关键词】 Jurkat 细胞； 启动区（遗传学）； 基因， 1 材料与方法 报告； 萤光素酶类 1.1 材料 中国医药生物技术, 2012, 7(4):281-285 1.1.1 细胞及