基于oppd／f基因的牛支原体贵州株分子生物学鉴定.pdfVIP

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　２０１７（０２上）：１６７－１７０，１７４ 基于ｏｐｐＤ／Ｆ基因的牛支原体贵州株 分子生物学鉴定 １ １ １，２ １，２ １，２ 袁海文 ，唐　沙 ，程振涛 ，文　明 ，周碧君 ， １，２ １ ３ 王开功 ，吴　燕 ，李　涛 （１．贵州大学 动物科学学院，贵阳５５００２５；２．贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点 实验室，贵阳５５００２５；３．贵州省动物疫病预防控制中心，贵阳５５０００８） 中图分类号：Ｓ８２３；Ｑ７８ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００４－７０３４（２０１７）０２－０１６７－０５ 关键词：牛支原体（Ｍｂ）；分离鉴定；ｏｐｐＤ／Ｆ基因；序列分析；同源性；系统进化树 摘　要：为了确定疑似牛支原体（Ｍｂ）肺炎病例病原种类，试验采用分子克隆技术对牛支原体贵州流 行株ｏｐｐＤ／Ｆ基因进行了克隆、测序及序列分析。结果表明：所合成引物从支原体分离培养物中扩增 出大小约为１９１２ｂｐ基因片段，与预期ｏｐｐＤ／Ｆ基因片段的大小相符，其测序序列与ＧｅｎＢａｎｋ数据库 中参考株核苷酸同源性为４２．６％～９９．８％，与标准株核苷酸同源性为９９．６％，与从发病动物中分离 得到的内蒙株和湖北株同源性最高（均达到９９．８％），与其他途径分离得到的参考菌株同源性都很 低；系统进化树分析显示，牛支原体贵州分离株与标准参考株在同一进化分支上，与临床易混淆的丝 状支原体丝状亚种存在明显差异。说明此次从疑似牛支原体肺炎病例中分离培养的支原体确为牛支 原体。 　　牛支原体属的牛支原体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｂｏｖｉｓ，Ｍｂ） 俗称牛肺疫。随后在中国各地的调查取样和检测中， 可引起多种重要的牛类疾病，如肺炎、乳腺炎、关节 一直没发现牛传染性胸膜肺炎的爆发和流行，但在 ［１］ 炎、中耳炎、生殖道疾病及结膜角膜炎 。１９６１年， ２００２—２００８年间，每年多个地区都有“疑似牛肺疫” Ｈａｌｅ等人首次在美国患有乳房炎的病牛中分离到该 的零星报道，并且具有共同的特征即发病对象均为新 ［６］ 病原，并根据牛 １６ＳｒＲＮＡ序列将其命名为牛支原 购入牛，特别是经过长途运输的牛 。牛支原体引 ［２］ 体 ，之后在欧洲和北美广泛流行并造成巨大的经 起的牛肺炎症状与丝状支原体丝状亚种引起的牛传 ［３］ ［４］ ［９］ 济损失 。１９８３年，我国科学家陈嘉棣等 在一患 染性胸膜肺炎十分相似 ，在临床诊断中易混淆，在 有乳房炎的牛乳中首次分离到牛支原体。自２００８年 防控中引起目标不明确。 以来，我国多地报道了由牛支原体引发的牛支原体肺 　　２０１５年，贵州省福泉市某养牛场出现严重的牛 炎的症状，从而证实中国部分地区也存在牛支原体肺 呼吸系统感染，主要表现为肺炎症状，病死率达 炎的流行［５－８］。２０１４年，贵州省有疑似牛支原体肺 ２０％，在临床诊断中无法与牛肺疫区分。该牛场是从 炎临床病例的报道，但目前尚无文献证实牛支原体病 吉林省长春市引种，引种前进行了严格的布鲁氏菌检 原的存在。 测，引种牛个体表现健康，到达贵州省后对引种牛进 　　研究显示，牛支原体在健康牛呼吸道中几乎分离 行了短期隔离，３～５ｄ后引种牛发生了咳嗽、关节炎 ［３］ 不到，只能从临床发病