高速逆流色谱分离纯化木蝴蝶中黄芩素和白杨黄素-分析化学.pdfVIP

维普资讯 第34卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究简报 特 1J『 2006年9月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry S243 $246 高速逆流色谱分离纯化木蝴蝶中黄芩素和 白杨黄素 孙爱玲 孙清华 柳仁民 (聊城大学化学化 1学院，聊城252059) 摘 要 建立r高速逆流色谱分离纯化木蝴蝶黄芩素和白杨黄素的方法。两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙 酯一甲醇一水 ，固定相为5：5：5：5(WV)体系的上相，以5：5：5：5( )和5：5：7：3( )体系的下相为流动相进行 梯度洗脱。从300mg木蝴蝶粗提物中一步分离纯化得到25．5mg黄芩素和36．6mg白杨黄素 经高效液相 色谱分析 ，纯度分别为99．2％和I100％。其化学结构由H—NMR和 C—NMR鉴定。 关键词 高速逆流色谱，术蝴蝶，黄琴素 ，白杨黄素 1 引 言 木蝴蝶为紫葳科植物木蝴蝶(Oroxylumindicum (L．)Vent．)的干燥成熟种子，是我同常片j中草药 之一，并被收入巾闰药典 ，具有止痛、止咳及清热等作用，用于治疗感冒、支气管炎和其它 -些疾病。 黄芩素和白杨黄素为木蝴蝶主要有效成分，具有清热、抗过 敏，抗氧化和抗癌等功能。近几年来对木蝴蝶中黄酮类成 分的研究非常活跃 “。因此，建立相关成分的高效分离 纯化方法具有重要意义。 高速逆流色谱 (HSCCC)是一种不使用固态支撑体或 载体的液液分配色谱技术。它克服了固相载体对样品的吸 图1 黄芩索 (R：OH)和白杨黄索 (R=H)的 附损失、变性等缺点，并可 以在短时间内实现高效制备性分 化学结构式 离 J，因而在中药有效成分的分离与纯化方面得到了广泛 Fig．1 Chemicalstructureofbaicalein(R=OH) 的应用 。本实验应用HSCCC从木蝴蝶药材中成功地 andchlTsin(R=tt) 分离纯化 黄芩素和白杨黄素(结构见图 1)，经高效液相 色谱(HPLC)分析，其纯度分别为99．2％和 100％。 2 实验部分 2．1 仪器、试剂与材料 TBE一300A高速逆流色谱仪(J，海同田生化技术有限公司)；AKTAprime泵及检测系统 (瑞士安玛 西亚生物有限公司)；HX1050恒温器 (北京博医康实验仪器有限公司)；1100高效液相色谱仪 (美国安 捷伦公司)；色谱柱：SpherigelODScI8(250mmx4．6mm，5Ixm)；Mercuryplus400核磁共振仪 (美国瓦 里安公司)。 粗提物的制备及 HSCCC分离用溶剂 (石油醚、乙酸乙酯、甲醇等)均为分析纯 (天津化学试剂三 厂)。HPIC分析用甲醇为色谱纯(禹城化工厂)，实验用水为二次蒸馏水。 木蝴蝶药材购于聊城市利民大药店，经山东巾医药大学张永清教授鉴定为正品药材。 2．2 样品制备 取 100g于600(：恒重的木蝴蝶药材粉碎，用700mL70％甲醇回流提取3次 (每次2h)，合并提取 液，减压蒸馏，得浸膏34．3g。浸膏加水溶解后用其3倍体积的正丁醇萃取3次，合并正r醇部分，减压 蒸馏回收溶剂，得浸膏16．6g。此浸膏再用石油醚一乙酸乙酯一甲醇一水(5：5：5：5，V／V)体系的下相100mL 溶解后，取等体积的上相萃取4次，合并上相部分，减压蒸馏得淡黄绿色粉末 (即小蝴蝶药材的粗提物) 5．8g，放置冰箱 内备用。 2005-09-06收稿 ；2006-01-28接受 维普资讯 244 分 析 化 学 第34卷 2．3 分配系数的测定 本实验用 HPLC测定样品在不同溶剂体系的分配系数。取适量木蝴蝶药材的粗提物于