大鼠胚胎干细胞遗传操作技术的研究进展-生物化学与生物物理进展.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 201 1, 38(11): 995~1000 鼠胚胎干细胞遗传操作技术的研究进展 孟姝* ( 中国科学院生物物理研究所，蛋白质科学研究平台，北京 100101) 摘要 大鼠胚胎干细胞(ES)的成功建立使大鼠的遗传学操作成为可能，运用同源重组原理改造ES 细胞的基因，为建立时空 特异性的基因敲除大鼠模型提供了基础 本文主要回顾了大鼠ES 细胞的建立过程，总结了大鼠ES 的培养、鉴定技术，分 析了各种大鼠基因敲除技术的优劣势和未来前景 在干细胞研究蓬勃发 的背景下，作为最有效地定向修饰基因的技术手 段，基于大鼠ES 细胞的基因敲除技术将在揭示基因的生理功能、研究人类疾病的遗传机制以及寻找新药物靶标的过程中发 挥更加重要的作用 关键词 ES 细胞，遗传操作，基因敲除，干细胞 学科分类号 Q813，Q789 DOI: 10.3724/SP.J.1206.201 1.00465 小鼠是当今世界上研究最为详尽的哺乳动物模 Brown-Norway、Wistar 等8 个大鼠品系的囊胚内 型，早在20 世纪80 年代已经建立了小鼠胚胎干细 细胞团中分离培养ES 细胞，获得的DA、SD 和 胞(embryonic stem cells，ES cells) 以及基于ES 细胞 Wistar 品系ES 细胞系具有生殖系遗传能力，但是 的基因敲除(gene knockout)技术 但是，小鼠动物 SD 和Wistar 品系的生殖系遗传效率相对低，基因 模型有其局限性 大鼠在生理和药理上都比小鼠更 打靶后的生殖系遗传能力无法维持，最终证实只有 接近于人类，是研究神经退行性疾病、心血管疾 DA 品系ES 细胞的两个细胞系DA2 和DA8 具有 病、糖尿病、肾病、乳腺癌等人类疾病的更理想的 持续的生殖系遗传能力[2-4] 动物模型 大鼠 细胞的培养 1.2 ES 2004 年，大鼠的全基因组测序工作顺利完成， 影响ES 细胞质量和生殖遗传能力的重要因素 但是仍然无法通过精细的遗传操作敲除大鼠基因组 包括培养基、饲养层细胞的质量、传代的方法和传 特定的基因，主要原因在于人们对ES 细胞的 代的次数等[5] 识严重不足，小鼠的胚胎干细胞提取和培养方法无 1.2.1 培养基 如何维持大鼠ES 细胞长期体外培 法套用到大鼠上 直到近几年，大鼠ES 细胞的培 养的自我更新，一直是个核心问题 最初的小鼠 养条件才确立，这为建立大鼠ES 细胞系及其基因 ES 细胞培养体系包含血清和维持其自我更新的有 [6] 敲除模型奠定了基础 效成分LIF，2003 年，Ying 等 发现骨形态发生蛋 白(BMP)可替代血清，并与LIF 一起维持小鼠ES 大鼠 细胞系 1 ES 细胞的自我更新 几个研究小组曾尝 用类似于小 大鼠 细胞系的建立 1.1 ES 鼠ES 细胞的培养体系从大鼠中分离ES 细胞，但 建立能生殖系遗传的大鼠ES 细胞株是获得大 未获成功 应其龙想到了ES 细胞的另一个重要性 鼠基因敲除模型的关键 2008 年底，美国南加州 质：多向分化潜能 如果ES 细胞的分化相关信号 大学应其龙领导的科研小组历史上首次从大鼠 获 [1] 得了真正的ES 细胞