文蛤粪卟啉原ⅲ氧化酶基因克隆及与壳色性状的相关性分析-水产学报.pdfVIP

第41 卷 第 7 期 水 产 学 报 Vol. 41, No. 7 2017 年 7 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA July, 2017 文章编号: 1000-0615(2017)07-1054-10 DOI: 10.11964/jfc.20150810044 文蛤粪卟啉原Ⅲ氧化酶基因克隆及与 壳色性状的相关性分析 1 1 1* 2 1 1 詹艳玲 ， 董迎辉 ， 何 琳 ， 阮文斌 ， 高晓艳 ， 林志华 (1. 浙江万里学院生物与环境学院，浙江省水产种质资源高效利用技术研究重点实验室，浙江 宁波 315100; 2. 上海海洋大学水产与生命学院，上海 201306) 摘要：粪卟啉原Ⅲ氧化酶(coproporphyrinogen-III oxidase, CPOX)是卟啉类化合物合成过程 中的关键酶，而卟啉是形成机体色素的重要化合物。采用RACE方法克隆获得文蛤粪卟 啉原Ⅲ氧化酶基因(MmCPOX) 的cDNA序列，该序列全长1490 bp，其中开放阅读框1173 bp， 编码390个氨基酸，预测分子量为12.04 ku，理论等电点为5.05 ；预测该酶含有跨膜结构 域和Coprogen-oxidas结构域；从构建的系统进化树来看，软体动物门的文蛤、加州海兔 和太平洋牡蛎首先聚在一起，显示出较近的亲缘关系。qRT-PCR结果显示，MmCPOX 基 因在文蛤早期发育的各个时期均有表达，但在D形幼虫期以后表达量显著升高；在文蛤 成贝的7个组织中，外套膜和血液中表达量显著高于其他组织，表明其与血卟啉合成和 壳色卟啉形成相关；在不同壳色文蛤中，红壳文蛤、暗纹文蛤、细纹文蛤的外套膜中表 达量显著高于黑斑文蛤和白壳文蛤，表明其参与形成红色和褐色壳色。 关键词: 文蛤；粪卟啉原Ⅲ氧化酶；壳色；克隆与表达 中图分类号: Q 785 ；S 968.3 文献标志码: A 卟啉类化合物是广泛存在于生物体内的一 创汇的重要鲜活水产品之一。文蛤的壳色和壳 类色素，哺乳动物红细胞中的血红素、某些软 面花纹多种多样，而壳色花纹漂亮的文蛤商品 体动物体内的血蓝素、双壳贝类壳表的色素等 价格显著提升。已有研究发现，文蛤的一些壳 [6] 物质都具有卟啉或者类卟啉的骨架。粪卟啉原 色花纹可以稳定遗传 ，且与生长、营养价值密 [7] Ⅲ氧化酶是合成卟啉类物质过程中的关键酶， 切相关 ，这为壳色遗传研究和壳色新品种开发 能够催化其底物粪卟啉原Ⅲ生成粪卟啉原Ⅸ， 提供了重要思路，然而目前有关文蛤壳色相关 进而生成原卟啉Ⅸ，最后最终生成卟啉。有研 基因的研究尚未见报道。本实验首次克隆获得 文蛤粪卟啉原Ⅲ氧化酶基因的cDNA全长，并研 究