靶向cd133的rna干扰对人肝癌smmc7721细胞的生长-新医学.pdfVIP

第３３卷 第２期 世界科技研究与发展 Ｖｏｌ．３３ Ｎｏ．２ 　 　 ２０１１年４月 ３２５－３２７页 ＷＯＲＬＤＳＣＩＴＥＣＨＲ＆Ｄ Ａｐｒ．２０１１ ｐｐ．３２５－３２７ 靶向 ＣＤ１３３的 ＲＮＡ干扰对人肝癌 ＳＭＭＣ７７２１细胞的生长抑制作用 龙　浩　曹　辉　李小青　李少林 （重庆医科大学放射医学教研室，重庆４０００１６） 摘　要：目的利用ＲＮＡ干扰技术下调ＳＭＭＣ７７２１肝癌细胞中ＣＤ１３３的表达，观察其在肝癌细胞增殖和侵袭方面的作用。方法 构建 ＣＤ１３３特异性的ｓｉＲＮＡ真核表达载体，转染 ＳＭＭＣ７７２１肝癌细胞并筛选出稳定表达 ｓｉＲＮＡ的转染克隆；应用 ＲＴＰＣＲ和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测 ＣＤ１３３ｍＲＮＡ和蛋白的表达；流式细胞仪检测细胞凋亡；ＭＴＴ法和 Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ法检测细胞体外增殖和侵袭能力。 结果 成功构建表达质粒 ＰＧＰＨ１／ＧＦＰ／ＮｅｏｓｈＧＡＰＤＨ、ＰＧＰＨ１／ＧＦＰ／ＮｅｏｓｈＮＣ、ＰＧＰＨ１／ＧＦＰ／ＮｅｏＣＤ１３３１和 ＰＧＰＨ１／ＧＦＰ／Ｎｅｏ ＣＤ１３３２，并转染ＳＭＭＣ７７２１肝癌细胞。筛选后得到稳定的细胞克隆。ＲＴＰＣＲ和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测显示转染ＰＧＰＨ１／ＧＦＰ／Ｎｅｏ ＣＤ１３３１和ＰＧＰＨ１／ＧＦＰ／ＮｅｏＣＤ１３３２后 ＣＤ１３３ｍＲＮＡ和蛋白表达均受到显著抑制，ｍＲＮＡ抑制率分别为４２９８％和６３１６％；蛋 白表达抑制率分别为４９４６％和５９１５％。与未转染组和ＰＧＰＨ１／ＧＦＰ／ＮｅｏｓｈＮＣ组相比，ＰＧＰＨ１／ＧＦＰ／ＮｅｏＣＤ１３３２组细胞凋亡比 例明显增加 （Ｐ＜００５）；ＰＧＰＨ１／ＧＦＰ／ＮｅｏＣＤ１３３２组细胞的增殖和侵袭能力也受到显著抑制 （Ｐ＜００５）。结论靶向ＣＤ１３３的 ＲＮＡ干扰能显著抑制人肝癌 ＳＭＭＣ７７２１细胞中的ＣＤ１３３表达，诱导细胞凋亡，抑制细胞的增殖和侵袭。 关键词：ＲＮＡ干扰；ＣＤ１３３，ＳＭＭＣ７７２１；凋亡；增殖 中图分类号：Ｒ７３５．７　　　文献标识码：Ａ　　　 ＧｒｏｗｔｈＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＳｍａｌｌＲＮＡＩｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅＴａｒｇｅｔｉｎｇｏｎＣＤ１３３ｏｆＨｕｍａｎ  ＨｅｐａｔｏｍａＣａｒｃｉｎｏｍａＣｅｌｌＬｉｎｅＳＭＭＣ７７２１ ＬＯＮＧＨａｏ　ＣＡＯＨｕｉ　ＬＩＸｉａｏｑｉｎｇ　ＬＩＳｈａｏｌｉｎ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＲａｄｉａｔｉｏｎＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００１６） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎＣＤ１３３ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｏｎｔｈｅｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎ ｏｆｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｍａｃａｒｃｉｎｏｍａＳＭＭＣ７７２１ｃｅｌｌｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｓｔａｒｇｅｔｉｎｇＣＤ１３３ｗｅｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ａｎｄｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＳＭＭＣ７７２１ｃｅｌｌｓ．ＲＴＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＤ１３３ｉｎＳＭＭＣ７７２１ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ