松材线虫bxpel2基因的克隆及rna干扰载体构建.pdfVIP

林业科学研究　２０１６，２９（２）：２８３ ２８８ ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ 　　文章编号：１００１１４９８（２０１６）０２０２８３０６ 松材线虫Ｂｘｐｅｌ２基因的克隆及 ＲＮＡ干扰载体构建 １ ２ ２ ２ 邱秀文 ，吴小芹 ，黄　麟 ，叶建仁 （１．九江学院鄱阳湖生态经济研究中心，江西 九江　３３２００５； ２．江苏省有害生物入侵预防与控制重点实验室，南京林业大学林学院，江苏 南京　２１００３７） 摘要：［目的］为了构建松材线虫（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ）果胶酶Ｂｘｐｅｌ２基因干扰载体。［方法］通过Ｔｒｉｚｏｌ法提 取松材线虫总ＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，设计带Ｔ启动子的果胶酶Ｂｘｐｅｌ２基因引物，以ｃＤＮＡ为模板扩增出果胶酶 ７ Ｂｘｐｅｌ２基因片段，连接到ＲＮＡ干扰载体，再以干扰载体为模板，ＰＣＲ扩增出目的片段后进行测序鉴定，合成果胶酶 Ｂｘｐｅｌ２基因双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ），采用ＲＴＰＣＲ检测松材线虫Ｂｘｐｅｌ２基因干扰后的表达情况。［结果］表明：１）提取的 松材线虫总ＲＮＡ完整性好，无降解；２）成功克隆出松材线虫果胶酶Ｂｘｐｅｌ２基因片段（７９０ｂｐ）并将其连接至ｐＭＤ１９ －１ －１ Ｔ载体；３）以ＲＮＡ干扰载体为模板合成ｄｓＲＮＡ，浓度分别为１．３１３ｍｇ·ｍＬ 和１．１５２ｍｇ·ｍＬ ；４）ＲＴＰＣＲ结果显 示，松材线虫经过ｄｓＲＮＡ干扰后，Ｂｘｐｅｌ２基因表达基本受到抑制。［结论］成功构建松材线虫果胶酶Ｂｘｐｅｌ２基因干 扰载体，为进一步研究Ｂｘｐｅｌ２基因在松材线虫致病过程中的作用和功能奠定了良好的基础。 关键词：松材线虫；Ｂｘｐｅｌ２基因；ＲＮＡ干扰 中图分类号：Ｓ７６３ 文献标识码：Ａ ＣｌｏｎｉｎｇｏｆＢｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓＰｅｃｔａｔｅＬｙａｓｅ２Ｇｅｎｅａｎｄ ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＩｔｓＲＮＡＩｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅＶｅｃｔｏｒ １ ２ ２ ２ ＱＩＵＸｉｕｗｅｎ，ＷＵＸｉａｏｑｉｎ，ＨＵＡＮＧＬｉｎ，ＹＥＪｉａｎｒｅｎ （１．ＰｏｙａｎｇＬａｋｅＥｃｏｅｃｏｎｏｍｙＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＪｉｕｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｕｊｉａｎｇ　３３２００５，Ｊｉａｎｇｘｉ，Ｃｈｉｎａ；２．ＪｉａｎｇｓｕＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒ ＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＭａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆＩｎｖａｓｉｖｅＳｐｅｃｉｅｓ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔ，ＮａｎｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ　２１００３７，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｖｅｃｔｏｒｏｆＢｘｐｅｌ２ｇｅｎｅｉｎＢｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ．［Ｍｅｔｈ ｏｄ］ＴｏｔａｌＲＮＡｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄａｎｄｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄｉｎｔｏｃＤＮＡ．ＴｈｅｐｒｉｍｅｒｏｆＢｘｐｅｌ２ｇｅｎｅｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＴｐｒｏｍｏｔｅｒ ７ ｗａｓｄｅｓｉｇｎｅｄｔｏａｍｐｌｉｆｙｔｈｅｆｒａｇｍｅｎｔｏｆＢｘｐｅｌ２ｇｅｎｅ．ＴｈｅｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｗｅｒｅｃｏｎｎｅｃｔｅｄｔｏＲＮＡｉｖｅｃｔｏｒ ａｎｄｕｓｅｄｔｏａｍｐｌｉｆｙｔｈｅｔａｒｇｅｔｆｒａｇｍｅｎｔｏｆ