H5和H7亚型禽流感多重RTPCR快速鉴别诊断方法的建立.pdfVIP

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集 H5和H7亚型禽流感多重RT--PCR快速鉴别 诊断方法的建立 孔令辰，任涛#，教艳华 (华南农业大学兽医学院禽病学教研室， 农业部养禽与禽病防治重点开放实验室，广东广州，510640) ， [摘 要] 分别针对AIV 度和Ex 明该方法具有较高的特异性、敏感性和重复性，应用该多重RT—PCR检测方法对人工发病临床样品进行RT--PCR检测，并 与病毒鸡胚分离法作比较，结果表明，AIV—H5亚型棉拭子多重RT—PcR检测结果与鸡胚分离结果符合率约为86．9％， AIV—H7亚型的符合率约为85．7％． 、* [关键词] 高致病性禽流感；H5亚型，H7亚型}多重RT--PCR方法}诊断 ，。 禽流感(AvianInfluenza，AI)是由正粘病毒速鉴别诊断和预警预报工作中发挥重要作用。 科、流感病毒属、A型流感病毒引起的禽类传染病。 该病在临床上所表现的症状变化从亚临床感染、中 1材料 轻度的呼吸系统疾病、产蛋下降到严重的致死性疾 1．1毒株 病，其严重程度取决于病毒的毒株以及被感染禽的 种类、日龄和有无并发症等因素[1]。其中。，高致病力 Avian Influenza，HPAI) 禽流感(HighlyPathogenic 已被世界动物卫生组织列为A类烈性传染病。2004 年在亚洲多个国家暴发的H5N1亚型的HPAI，且 72／04(H9N2)、 毒株A／chicken／Guangdong／1 在越南和泰国发生感染人并致人死亡事件[2]，特别 NDV毒株La Sota以及IBV毒株M41均由华南农 是2005年以来，随着侯鸟的迁徙，H5禽流感呈蔓延业大学兽医学院禽病教研室提供。 趋势，可见，禽流感已经成为危害禽类和人类健康的 1．2实验动物9—11日龄非免疫鸡胚购自佛山墟 地区流行重大疫病，使得该病毒在公共卫生学的意 岗黄种鸡场；1日龄杂交黄羽混合健康鸡苗购自华 义十分突出。虽然我国暂无H7亚型AIV的暴发，南农业大学种鸡场，隔离饲养至28日龄，经AGP、 但建立一套敏感、特异、快速的H7亚型AIV监测Hl检验禽流感为阴性。 预防措施是非常必要的。国家标准及农业行业标准 1．3试剂TRIzol 规定禽流感诊断及检验技术包括：病毒分离、免疫荧 品；AMV、dNTPs、PRI、Ex DNA Taq酶、DL2000 光、血凝抑制、琼脂扩散、RT—PCR等。其中RT—Marker、随机引物RandomprimersP(N)6、pMDl8 PCR技术具有敏感、特异、快速并且散毒的危险较 一T载体均为宝生物工程(大连)有限公司产品；工 小的优点口]，成为当前诊断禽流感的主要方法。本文 程菌TOPl0华南农业大学兽医学院禽病教研室提 建立了H5和H7亚型AIV的多重RT--PCR检测供，其他未标明的生化试剂均为国产分析纯级别。 方法并通过条件优化，提高诊断的敏感性和特异性， 为H5和H7亚型AIV的多重RT--PCR快速诊断2方法 2．1AIV 试剂盒的研制打下坚实基础，希望能在禽流感的快 H5和H7亚型毒株的部分生物学特性的 ·作者简介：孔令辰(1980--)，男，广州人，硕士研究生，从事预防兽医学研究 #通讯作者：任涛 一68—