小干扰rna沉默细胞外钙敏感受体抑制人脐静脉内皮细胞-生理学报.pdfVIP

小干扰rna沉默细胞外钙敏感受体抑制人脐静脉内皮细胞-生理学报.pdf

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生理学报Acta Physiologica Sinica , June 25, 2012, 64(3): 289–295 289 研究论文 小干扰RNA沉默细胞外钙敏感受体抑制人脐静脉内皮细胞钙 NO 内流和 生成 1 1 1 2 1,* 梁霄,罗小林 ,钟华 ,胡清华 ,何芳 1 / 832002 2 新疆石河子大学医学院病理生理学教研室新疆地方与民族高发病教育部重点实验室,石河子 ;华中科技大学同济 / 430030 医学院病理生理学系卫生部呼吸疾病重点实验室,武汉 摘 要:为了探讨细胞外钙敏感受体(extracellular Ca2+ -sensing receptor, CaR)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC) NO GenBank CaR cDNA RNA 介导钙内流和 生成中的作用,本实验针对 中人 的 序列设计合成小干扰 (small interference RNA, siRNA),并将其转染入HUVEC 中,采用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,Western blot检测CaR 蛋白表达及转染后的干扰效率,Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2+浓度(intracellular Ca2+ concentration, [Ca2+] ) NO i 变化, 荧光探 DAF-FM DA NO (endothelial nitric oxide synthase, eNOS) 针 负载检测细胞内 的生成及内皮型一氧化氮合酶 活性。结果显示,实 CaR siRNA HUVEC Western blot 48 h CaR (P 0.05) 验成功将 转入 , 检测结果显示转染 后, 蛋白表达降低 ;与未转染对照组和 + Ca2+ CaR siRNA [Ca2+] eNOS NO (P 0.05) 阴性对照组相比,在精胺 刺激下, 转染组的 i 、 活性和 含量均显著降低 。上述结果 CaR HUVEC Ca2+ NO 表明, 在精胺介导的

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