miR-497-5p对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用及机制.pdfVIP

山东医药2017年第57卷第 5期 miR一497—5p对人宫颈癌细胞增殖的 抑制作用及机制 张君，高兰阳，詹平。毛熙光 (西南医科大学附属医院，四川泸州646000) 摘要：目的 探讨miR-497-5p对人宫颈癌细胞 (HeLa)增殖的抑制作用及机制。方法 将对数生长期人宫颈 癌HeLa细胞随机分为两部分，第一部分细胞随机分为四组：miR-497-5pmimicsNC+IKCal3端非翻译区(3．URT) 野生型双荧光素酶重组质粒载体 (IKCal—wt)转染组 、miR497-5pmimics+IKCa1．wt转染组 、miR-497-5pmimicsNC +3-URT突变型双荧光素酶重组质粒载体 (IKCal-mut)转染组 、miR-497—5pmimics+IKCa1．mut转染组 ，分别转染 相应质粒48h，用双荧光素酶报告基因检测系统检测HeLa细胞荧光素酶活性。第二部分细胞随机分为三组：miR． 497-5pmimics转染组、miR-497-5pmimicsNC转染组和空白对照组，分别转染相应质粒 ，用 qRT．PCR技术检测细胞 IKCalmRNA表达 ，Westernbohting法检测细胞 IKCal蛋 白表达，CCK-8法检测细胞增殖能力。结果 第一部分细 胞中的miR-497-5pmimics+IKCal-wt转染组荧光素酶活性较其他三组降低 (P均0．05)，其他三组间比较差异无 统计学意义 (P均0．05)，证实miR-497-5p与 IKCal3一URT存在特异性结合位点。第二部分细胞 中的miR-497— 5pmimics转染组 IKCalmRNA、蛋白的相对表达量较其他两组降低 (P均0．05)，其他两组比较差异无统计学意 义(P均 0．05)。第二部分细胞培养24、48、72、96h，miR-497-5pmimics转染组增殖能力均较其他两组降低 (P均 0．05)，其他两组比较差异无统计学意义 (P均0．05)。结论 miR-497-5p可以通过负向调控 IKCal基因表达 以抑制宫颈癌细胞增殖。 关键词 ：子宫颈癌；微小RNA-497-5p；中电导钙激活性钾离子通道 ；IKCal基因；HeLa细胞；细胞增殖 doi：10．3969／j．issn．1002—266X．2017．05．005 ， 中图分类号：R737．33 文献标志码：A 文章编号：1002—266X(2017)05-0015-04 InhibitoryeffectofmiR-497-5ponproliferationofhumancervJcaIcarcinomaeelI ZHANGJun，GAOLanyang，ZHANP ，MAOXiguang (TheAffiliatedHospitalofSouthwestMedicalUniversity，Luzhou646000，China) Abstract：0bjective Toinvestigatetheinhibitoryeffectandmechanism ofmiR-497—5ponproliferationofhuman cervicalcancerHeLacells．Methods Thehumancervical cancerHeLacellsinthelogarithmicgrowthphasewererandom· lydividedintotwoparts．Thefirstpartwasrandomlydividedinto4 groups：miR-497-5pmimicsNC and IKCal—wt co- transfectiongroup，miR-497-5pmimicsnadIKCal—wt co-transfectiongroup，miR-497—5pmimicsNC nadIKCal—mutco- transfectiongroupandmiR-497-5pmimicsandIKCal-·mutco--transfectionrgoupwhichweretransfeetedbycorresponding plasmidsfor48h．TheluciferaseactivityofHeLacellswasdetectedbydoubleluciferasereporterassaysystem．Thes